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实验用品的灭菌方法简介



录入时间:2020-4-28 14:15:57 来源:青岛海博生物

  微生物实验室常用的培养皿、三角瓶、吸管、试管、过滤器必须彻底灭菌,否则会影响实验结果。

 

一、实验用品的灭菌

 

  1.高压蒸气灭菌。高压蒸气灭菌用121℃蒸气压力灭菌20-30min即可。高压蒸气灭菌后, 玻璃器皿上常常带有水珠,可再用烘箱烘干。

  2.干热灭菌干热灭菌用烘箱。通常于150-160℃灭菌2小时。温度不可过高,超过180℃时棉塞和纸张易烤焦起火。器皿放入烘箱之前必须是干燥的,以免引起玻璃的破碎。器皿在烘箱内不宜过满,应留有一定的空隙。温度应从室温逐渐升至所需温度。结束后也应逐步降温直至低于60℃时才可开门取出灭菌的器皿,否则玻璃可能因突然遇冷而破碎。

 

二、培养基的灭菌

 

  培养基的灭菌可用湿热灭菌或过滤灭菌。湿热灭菌有高压蒸气灭菌和常压蒸气灭菌两种。

 (1)高压蒸气灭菌在高压蒸气灭菌器中进行,利用提高蒸气压力而使温度增高的作用,因而提高了蒸气灭菌效力。蒸气压力和温度关系见表11-2。

上表所列的温度是饱和蒸气压力下的温度。但如高压蒸气灭菌器中的空气未排净,那么实际温度就达不到应有的温度。例如,完全不排除灭菌器中的空气,当表压为1kg/cm2,实际温度仅为100℃;如排除灭菌器中1/2的空气,当表压为1kg/cm2气实际温度仅为112℃。因此使用高压蒸气灭菌时务必将其中空气全部排除,才能达到预期效果。一般培养基灭菌时大多使用1kg/cm2,15~20·min。如灭菌器中装填较满、培养基装量较大(1L以上)或培养基污染杂菌较多(如蚨皮)时,可适当延长灭菌时间达30min。个别情况下可用1 kg/cm2以上的蒸气压力灭菌。培养基中如含有高温时易分解破坏的物质(如某些含糖培养基),可采用较低的压力,如0.6~0.8kg/cm2。配制这种培养基时应尽量减少杂菌污染。所用的试管或三角瓶及其棉塞应先行灭菌。培养基中其他的耐热成分也可先行高压灭菌。加入不太耐热组分,分装后再用较低压力灭菌。

 (2)常压蒸气灭菌也称作间歇蒸气灭菌,用于在100℃以上易千破坏的培养基的灭菌,如牛奶、明胶等。常压蒸气灭菌也就是用蒸气蒸。在灭菌器中温度升到100℃时,在不加压力的情况下使水保持沸腾,即保持lOO℃30 min。取出灭菌的培养基,放室温或保温箱中。第二、三日连续如上法于100℃各灭菌30min即可。细菌的营养体可在可在第二日的100℃30min杀死。第三日再将少数残留的细菌杀死,这样可达到完全灭菌的目的。

 (3)过滤灭菌用于不能用热灭菌的培养基, 如某些易破坏或易挥发的物质。常用的除去细菌的过滤器有赛氏过滤器和微孔膜过滤器。这两种过滤器的形式大致相同,只是过滤板不同。过滤细菌用的赛氏过滤器的规格为EK,微孔膜的规格为0.22~0.45μm。使用前,将过滤器连同吸滤瓶等按无菌操作的要求装好,用纱布包好,高压蒸气灭菌。使用时用真空泵抽气吸滤,不可将漏斗中的液体抽干。使用过的滤板需弃去。有的微量物质,如指示剂颜色等可能被滤板吸附,从培养基中损失掉。赛氏过滤板尤其易吸附微量物质,使用时应注意。

  本文节选自《常见细菌系统鉴定手册》第十一章。

 

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