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革兰氏染色的方法



录入时间:2020-4-29 15:14:29 来源:青岛海博生物

(一)染剂(Hucker修改法)

 

    1.结晶紫的混合液

 甲液:结晶紫

 2.0g

  乙醇(95%)

 20ml

 乙液:草酸铵

 0.8g

 蒸馏水

 80ml

 

     将甲、乙两液相混,静置48h后过滤实用。此染液较稳定,在密闭的棕色瓶中可储藏数月。

 

   2.碘液

1.0g

碘化钾

2.0g

蒸馏水

300ml

 

     先用少量(3~5ml)蒸熘水溶解碘化钾,再投入碘片,待碘全溶解后,加水稀释至300ml。

 

   3.脱色液

 

   (1)95%乙醇

   (2)丙酮乙醇溶液:乙醇(95%)        70ml

            丙酮            30ml

  

   4.复染液

0.5%的番红(Safranine0)

      水溶液

番红2.5%的乙醇溶液

        20ml

蒸熘水

       80 ml

可将2.5%番红0乙醇溶液作为母液, 使用时再稀释

 

(二)染色步骤

 

   (1)用接种针挑取少许菌苔,涂布在干净玻片上的一滴无菌水或蒸馏水中,风干固定

   (2)用结晶紫的混合液染1min后,用水洗。

   (3)碘液作用1min,水洗,吸干。

   (4)用95%乙醇或丙酮乙醇溶液脱色,流滴至洗脱液至无色(约30s)。用番红液染2-3min,水洗、风干。

 

(三)结果观察

 

   深紫色为革兰氏染色阳性细菌;红色为革兰氏染色阴性细菌。

 

(四)注意事项

 

   (1)所观察的细胞一般为24h的培养物。

   (2)染色结果可疑时,以金黄色葡萄球菌为阳性对照菌,以大肠埃希氏菌为阴性对照菌。

   本文节选自《常见细菌系统鉴定手册》第十二章。

 

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