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（一）染剂(Hucker修改法）
1.结晶紫的混合液
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甲液：结晶紫 |
2.0g |
乙醇（95%） |
20ml |
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乙液：草酸铵 |
0.8g |
蒸馏水 |
80ml |
将甲、乙两液相混，静置48h后过滤实用。此染液较稳定，在密闭的棕色瓶中可储藏数月。
2.碘液
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碘 |
1.0g |
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碘化钾 |
2.0g |
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蒸馏水 |
300ml |
先用少量(3～5ml)蒸熘水溶解碘化钾，再投入碘片，待碘全溶解后，加水稀释至300ml。
3.脱色液
（1）95%乙醇
（2）丙酮乙醇溶液：乙醇（95%） 70ml
丙酮 30ml
4.复染液
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0.5％的番红(Safranine0) |
水溶液 |
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番红2.5％的乙醇溶液 |
20ml |
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蒸熘水 |
80 ml |
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可将2.5％番红0乙醇溶液作为母液， 使用时再稀释 |
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（二）染色步骤
(1)用接种针挑取少许菌苔，涂布在干净玻片上的一滴无菌水或蒸馏水中，风干固定
(2)用结晶紫的混合液染1min后，用水洗。
(3)碘液作用1min,水洗，吸干。
(4)用95％乙醇或丙酮乙醇溶液脱色，流滴至洗脱液至无色（约30s)。用番红液染2-3min,水洗、风干。
（三）结果观察
深紫色为革兰氏染色阳性细菌；红色为革兰氏染色阴性细菌。
（四）注意事项
(1)所观察的细胞一般为24h的培养物。
(2)染色结果可疑时，以金黄色葡萄球菌为阳性对照菌，以大肠埃希氏菌为阴性对照菌。
本文节选自《常见细菌系统鉴定手册》第十二章。
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