色氨酸脱氨酶的测定方法

1.方法一

   （1）培养基

   加酚红至微橙的黄色(25-30mg), pH约为6.8-6.9,分装于三角瓶中，121℃蒸气灭菌20min。另将20g尿素溶于100ml水中，过滤灭菌，用无菌操作与上述热灭菌的培养基相混，并分装于无菌试管内，每管液层高约3～4cm。

   （2）接种与测定：将试验菌株的幼龄培养物接种于上述培养液中，适温培养24h,取2～4滴培养液，与1滴三氯化铁溶液（约33%）相混。如呈红褐色，则为色氨酸脱氨酶阳性反应。如无颜色变化则为阴性反应。可用变形菌作为阳性对照。

   （3）结果观察：如培养后的培养液由黄色转红色，表示有脲酶存在。如用对二甲基氨基苯甲醒试剂测定，可检查有无吲哚形成。如不拟测定脲酶，配制培养基时可不加酚红和尿素。

2.方法二

   （1）试液

   （2）接种与培养

   将试验菌接种于肉汁陈斜面，适温培养24h。

   （3）测定方法

   测定方法：取干净的试管二支，每管中加四滴L-色氨酸0.2%-0.5％溶液和四滴生理盐水（或四滴pH6.8缓冲液A和B)，然后将测定菌的菌苔混到上述溶液的二支试管中制成浓菌液。另二支试管中不加菌苔作为对照。置室温15-20 min后，每管中加入一滴三氯化铁（33%）溶液，立即呈现红褐色，表示阳性反应， 不变色者表示阴性反应。可用变形菌作为阳性对照。

   本文节选自《常见细菌系统鉴定手册》第十四章。

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