菌种保存方法的简单介绍

  菌种保藏是微生物学工作者的重要研究手段之一，其目的是把菌株的原始性状和优良性状保存下来，防止死亡、退化或杂菌污染。菌种保藏方法很多，现简单介绍几种：

  1.低温保藏法

  固体斜面抱子，液体抱子，麸皮，大米，小米或玉米粉等材料制备的抱子等，都可用4℃左右低温冰箱保存，时间在30～60天（根据菌种稳定性而定），也可在棉塞上浸蜡，一般可达3～4个月，至半年之久。

  2．低温定期移植保存法

  这是一种经典的简易保存法，即菌种接种于所要求的斜面培养基上，置最适温度下培养，至所需要的发育阶段后，置于低温，干燥处保存，每隔3～6个月移植培养一次(具体视菌种特性而定)。

  除斜面定期移植外，还有穿刺培养定期移植法，对大肠杆菌，极毛芽抱杆菌效果良好，穿刺培养基琼脂的含量比常用量少1/2（约0.6 %～0.8%）。

  3.液体石蜡法

   选用优质纯净的液体石蜡，经121℃高压灭菌2 h,然后170℃干热处理1～2 h,以除水分，冷却后加到斜面上，覆盖以超过斜面为宜。菌种用的试管塞为橡皮塞，并用蜡封上，放阴凉室温处即可。

  4.砂土保藏法

  （1）砂土载体准备：将黄砂用自来水浸泡洗涤数次，使pH为中性，然后滤出烤干，用60目钢丝筛除去粗粒备用，同时采用贫痔的深挖lm以下的土，自来水浸泡洗涤数次使pH中性，待沉淀后，弃去上清液，烤干后辗末，120目过筛，将上述砂和土以1:1混合，装入1.2 cm X lO cm安培管中，装量为试管1/7左右，塞好棉塞，120℃高压灭菌1 h,间歇灭菌5～6次，烤干备用。

  （2）菌种准备：取生长良好、孢子丰富的新鲜斜面。需纯菌，加灭菌蒸熘水2～2.5 ml,轻轻刮下孢子，吸0.2～0.3 ml到灭菌备用的沙土中，真空干燥4～6 h,低温4℃保存。适用于产芽孢的细菌、放线菌和真菌、可保藏5～7年。

  5.冷冻干燥法

  这是菌种保藏比较理想的一种方法，适用千多种细菌和放线菌。在多数情况下，也适用于真菌、酵母、病毒、噬菌体、立克次氏体。它具有变异少，保藏时间长，输送贮存方便之优点。

  6.液氮超低温保藏法

  （1）材料：液氮冰箱或液氮法。

     优质玻璃瓶安瓿管（规格7.5mm X 10mm）

     液氮

  （2）方法：将欲保藏的菌种悬液或菌块（常用保护剂为10％甘油或5%～10％二甲基亚枫）密封于安瓿瓶内，先经控制致冷速度，预冻后，贮藏于－l5O℃至－196℃液氮冰箱中保存，保存期间需注意及时补充液氮。需恢复培养时，取出安瓶管急速放35～40℃温水中，使其迅速融化后，打开，移种。这是一种保藏菌种的好方法，国外已广泛使用。

  本文节选自《常见细菌系统鉴定手册》第十七章。

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