HBI大肠杆菌生化鉴定条使用方法

一、产品介绍

 产品用途：用于大肠杆菌IMViC试验鉴定。

 产品组成：包含靛基质试验（吲哚试验）、甲基红试验（MR）、V-P试验、西蒙氏柠檬酸盐利用试验四项生化反应。

 配套试剂：需配套使用Kovacs氏靛基质试剂、甲基红试剂、V-P试剂。

二、接种方法及结果记录

 1.实验准备：从包装盒中取出一条生化鉴定条，打开盖子，用打孔器开孔或直接把膜撕掉。如果染菌或变色，则不能使用，重新拿一条。注：打孔器用75%酒精擦拭后使用。

 2.接种方法：取一内盛2ml无菌水或无菌生理盐水试管，用接种针或接种环从营养琼脂平板上挑取1-2个菌落至无菌生理盐水中仔细研磨制成均一细菌悬液，每孔加入100uL菌悬液。

 3.接种完后做好标记，盖上盖子，放入底托中，放置36℃±1℃培养。

 4.结果记录：

 靛基质试验：培养18-24h后，滴加1-2滴Kovacs氏靛基质试剂，如有玫红色环出现，则记“+”（阳性），如为黄色环，则记“-”（阴性）；

 甲基红试验（MR）：培养24-48h后，滴加1-2滴甲基红试剂，如显红色，则记“+”，如显橙黄色，则记“-”;

 V-P试验：培养24-48h后，滴加V-P试剂A液3滴和B液1滴混匀，继续培养0.5-4h，如变红，则记“+”，如4h不变红或显橙黄色，则记“-”；

 西蒙氏柠檬酸盐：培养24-48h后，如出现变蓝色，则记“+”，如48h不变蓝色，则记“-”。

三、结果判定

 结果判定需参考《GB4789.38-2012食品安全国家标准食品微生物学检验大肠埃希氏菌计数》。标准中对大肠杆菌的定义为：“广泛存在于人和温血动物的肠道中，能够在44.5℃发酵乳糖产酸产气，IMViC（靛基质、甲基红、VP试验、柠檬酸盐）生化试验为“++--”或“-+--”的革兰氏阴性杆菌”。

 因此，若待测菌在大肠杆菌生化鉴定条得出结果为“++--”或“-+--”，并且同时满足“能够在44.5℃发酵乳糖产酸产气”和“革兰氏阴性杆菌”两个条件，方可确定待测菌为大肠杆菌（可用EC肉汤培养基或乳糖发酵培养基鉴定待测菌是否能够在44.5℃发酵乳糖产酸产气，可用革兰氏染色法观察待测菌是否为革兰氏阴性杆菌）。

 注意事项：本产品仅用于测定大肠杆菌的IMViC试验，不能仅凭此鉴定条确证是否为大肠杆菌，必须同时结合乳糖发酵试验和革兰氏染色，可判断是否为大肠杆菌（如普通变形杆菌，IMViC试验结果虽与大肠杆菌相同，但乳糖发酵试验为阴性，以此进行排除）。

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