细菌的简单染色法

   一、目的要求
1 学习微生物涂片、染色的基本技术，拿握细菌的简单染色法．
2 初步认识细菌的形态特征。
3 巩固显微镜（油镜）的使用方法和无菌操作技术．
二、基本原理
简单染色法是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法．此法操作简便，适用于菌体一般形状和细菌排列的观察。
常用碱性染料进行简单染色，这是因为：在中性、碱性或弱酸性洛液中，细菌细胞通常带负电荷，而碱性染料在电离时．其分子的染色部分带正电荷（酸性染料电离时，其分子的染色部分带正电荷），因此碱性染料的染色部分很容易与细菌结合使细菌着色．经染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的对比，在显微镜下更易于识别．常用作简单染色的染料有：美蓝、结晶紫、碱性复红等．
当细菌分解搪类产酸使培养基pH 下降时，细菌所带正电荷增加，此时可用伊红、酸性复红或刚果红等酸性染料染色．
三、器材
l.菌种枯草芽孢杆菌12 ~18h 营养琼脂斜面培养物，藤黄微球菌约24h 营养琼脂斜面培养物．
2 ．染色剂吕氏碱性美蓝染液（或草酸按结晶紫染液），齐氏石炭酸复红染液．
3 ．仪器或其他用具 显微镜．酒精灯，载玻片，接种环，双层瓶（内装香柏油和二甲苯），擦镜纸，生理盐水等．
四、操作步骤．
1 ．涂片
2 ．干燥
室温自然干燥。
3 ．固定
涂面朝上，通过火焰2 ~ 3 次．此操作过程称热固定，其目的是使细胞质授固，以固定细胞形态，并便之牢固附着在载玻片上．
4 ．染色
将玻片平放于玻片搁架上，滴加染液于除片上（染液刚好覆盖涂片薄膜为宜）. 
5 ．水洗
倒去染液．用自来水冲洗，直至涂片上流下的水无色为止，
6 ，干燥
自然干燥，或用电吹风吹干，也可用吸水纸吸千．
7 ，镜检
涂片干后镜检．
涂片必须完全干燥后才能用油镜观察.
五、实验报告
1 ．结果
根据观察结果，绘出两种细菌的形态图．
2 ．思考题
( 1) 你认为制备细菌染色标本时，尤其应该注意哪些环节？
( 2 ）为什么要求制片完全干燥后才能用油镜观察？
( 3 ）如果你的涂片未经热固定，将会出现什么问题？如果加热温度过高、时间太长，又会怎样呢？
   

 

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