革兰氏染色法

  目的要求
1 ．学习并初步掌握革兰氏染色法。
2 .了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性．
二、基本原理
革兰氏染色法是1884 年由丹麦病理学家Christain Gram创立的，而后一些学者在此基础上作了某些改进，革兰氏染色法是细菌学中最重要的鉴别染色法，
革兰氏染色法的基本步骤是：先用初染剂结晶紫进行染色，再用碘液媒染，然后用乙醇（或丙酮）脱色，最后用复染剂（如番红）复染．经此方法染色后，细胞保留初染剂蓝萦色的细菌为革兰氏阳性菌；如果细胞中初染剂被脱色剂洗脱而使细菌染上复染剂的颜色（红色）．该菌解于革兰氏阴性菌．
革兰氏染色法将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性，是由这两类细菌细胞壁的结构和组成不同决定的．实际上，当用结晶紫初染后，像简单染色法一样，所有细菌都被染成初染荆的蓝萦色．碘作为媒染剂，它能与结晶萦结合成结晶紫一碘的复合物，从而增强了染料与细菌的结合力甲当用脱色剂处理时，两类细菌的脱色效果是不同的，革兰氏阳性细菌的细胞壁主要由肤聚籍形成的网状结构组成．壁厚、类脂质含量低，用乙醇（或丙酮）脱色时细胞壁脱水、使吠聚塘层的网状结构孔径缩小，透性降低，从而使结晶紫一腆的复合物不易被洗脱而保留在细胞内，经脱色和复染后仍保留初染剂的蓝紫色．革兰氏阴性菌则不同，由于其细胞壁肤聚糖层较薄、类脂含t 高．所以当脱色处理时，类脂质被乙醇〔 或丙酮）溶解，细胞壁透性增大，便结晶紫一碘的复合物比较容易被洗脱出来，用复染剂复染后，细胞被染上复染剂的红色。
革兰氏染色反应是细菌重要的鉴别特征，为保证染色结果的正确性，采用规范的染色方法是十分必要的．本实脸将介绍被普遥采用的H 成ker 氏改良的革兰氏染色法．
三、器材
1 ．菌种大肠杆菌约24h 百养琼脂斜面培养物，金黄色葡萄球菌约24h 营养琼脂斜面培养物．蜡样芽孢杆菌12~20h 营养琼脂斜面培养物。
2 ．染色剂革兰氏染色液．
3 ．仪器或其他用具 
四、操作步骤
1 ．制片
取苗种培养物常规涂片、干燥、固定．
要用活暇生长翔的幼培葬临作，兰氏染色；涂片不宜过厚．以免脱色不宪全造成假阳性；火焰固定不宜过热（以玻片不扭手为宜）. 
2 ．初染
滴加结晶紫（以刚好将菌膜覆盖为宜）染色1~2min，水洗。
3 ．媒染
用碘液冲去残水，并用碘液覆盖约1min，水洗．
4 ．脱色
用滤纸吸去玻片上的残水，将玻片倾斜，在白色背景下．用滴管流加95 ％的乙醇脱色，直至流出的乙醇无紫色时，立即水洗。
5 ．复染
用番红掖复染约2min，水洗．
6 ．镜检
干燥后，用油镜观察．
菌体被染成蓝紫色的是革兰氏阳性菌，被染成红色的为革兰氏阴性菌．
7 ．混合涂片染色
按上述方法，在同一载玻片上．以大肠杆菌和蜡样芽袍杆菌或大肠杆菌和金黄色葡萄苗作混合涂片染色、镜检进行比较。
五、实验报告
1.结果
列表简述3 株细菌的染色观察结果（说明各菌的形状颐色和革兰氏染色反应〕 ，2 ．思考题
（1）你认为哪些环节会影响革兰氏染色结果的正确性？其中最关键的环节是什么？ 
（2）现有一株细菌宽度明显大于大肠杆菌的粗壮杆菌，请你鉴定其革兰氏染色反应．你怎样运用大肠杆国和金黄色葡萄球菌为对照菌株进行涂片染色，以证明你的染色结果正确性．
( 3 ）你的染色结果是否正确？如果不正确，请说明原因。
( 4 ）进行革兰氏染色时，为什么特别强调菌龄不能太老，用老龄细菌染色会出现什么问题？
( 5 ）革兰氏染色时，初染前能加碘液吗？乙醇脱色后复染之前，革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌应分别是什么颜色？
（6）你认为革兰氏染色中，哪一个步脚可以省去而不影响最终结果？在什么情况下可以采用？
 
   

 

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