细菌的芽孢染色法

 目的要求
1 ．学习并掌握芽孢染色法．2 ．初步了解芽孢杆菌的形态特征，
二、基本原理
芽孢又叫内生孢子，是某些细菌生长到一定阶段在菌体内形成的休眠体，通常呈国形或肺圈形．细曲能否形成芽孢叙及芽孢的形状芽孢在芽孢囊内的位t 、芽鹅班是否膨大等特征是鉴定细菌的依据之一
由于芽孢壁厚、透性低上不易着色．当用石炭酸复红．结晶紫等进行单染色时，菌体和芽孢囊着色，而芽孢囊内的芽孢不着色或仅显很淡的颇色，游离的芽孢呈淡红或淡蓝紫色的圈或捕圈形的圈，为了使芽孢粉色便于观察．可用芽孢染色法。
芽孢染色法的基本原理是：用着色力强的染色荆孔雀绿或石炭酸复红，在加热条件下染色，使染料不仅进人蔺体也可进人芽孢内，进人菌体的染料经水洗后被脱色，而芽袍一经普色难以被水洗脱，当用对比度大的友染荆染色后，芽孢仍保留初染剂的颇色，而菌体和芽孢囊被染成复染剂的颜色，使芽袍和菌体更易于区分
三、器材
1 ．菌种 蜡样芽孢杆菌约2d 百养琼脂斜面培养物，球形芽袍杆菌1~2d 营养琼脂斜面培养物．
2 ．染色荆5 肠孔雀绿水溶液，0 . 5 ％番红水溶液。
3 ．仪器或其他用具小试管．滴管，烧杯，试管架，载玻片，木夹子，显微镜等．
四、操作步骤
（一）改良的Schaeffer-Fulton氏染色法
1 ．制备菌悬液
加1~2 滴水于小试管中，用接种环挑取2 ~3 环菌苔于试管中，搅拌均匀，制成浓的菌悬液． 
2 染色
加孔雀绿染液2~3 滴于小试管中，并使其与菌液混合均匀，然后将试管置于沸水浴的烧杯中，加热染色15~20 mm 。
3 涂片固定
用接种环挑取试管底部菌液数环于洁净载玻片上，涂成薄膜，然后将涂片通过火焰3 次温热固定。
4 脱色
水洗．直至流出的水无绿色为止．
5 ．复染
用番红染液染色2~3min ，倾去染液并用滤纸吸干残液．
6 ．镜检
干澡后用油镜观察．
芽孢呈绿色，芽孢囊及营养体为红色．
(二〕 Schaeffer-Fulton氏染色法
1 ．制片
按常规涂片、下燥、固定，
2 ．染色
加数滴孔雀绿染液于涂片上，用木夹夹住载玻片一端，在微火上加热至染料冒燕气并开始汁时．维持5min . 
加热过程中及时补充染液．切勿让涂片干涸．
3 ．水洗
待玻片冷却后，用缓流自来水冲洗，直至流出的水无色为止。
4 ．复染
用番红染液复染2min . 
5  水洗
用缓流水洗后，吸干，
6 ．镜检
干后油镜观察。
芽孢呈绿色，芽孢囊及营养体为红色．
五、实验报告
1 ．结果
绘图表示两种芽孢杆茵的形态特征（注意芽孢的形状、着生位置及芽孢囊的形状特征）. 2 ．思考题
( l ）说明芽孢染色法的原理．用简单染色法能否观察到细苗的芽孢？
( 2 ）用Schaefrer 一Fulton 氏染色法加热染色时，若因一时疏忽玻片上的染液被烘千，此时能否立即补加染液？为什么？
( 3 ）若涂片中观寮到的只是大且游离芽孢，很少看到芽孢袭及营养细胞，你认为这是什么原因？
  
   

 

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