茜素-β-半乳糖苷琼脂原理及实验现象

李令梅
录入时间:2020-7-24 9:50:24 来源：青岛海博生物

一、试验原理：

用于食品、饮料和饮用水中大肠菌群快速检测和计数(GB/T4789.32－2002)。

胰酪胨提供氮源、维生素和矿物质满足细菌生长的需求；氯化钠可维持均衡的渗透压；磷酸二氢钾和磷酸氢二钾是缓冲剂；月桂基硫酸钠抑制革兰氏阳性菌；大肠菌群可产生β-半乳糖苷酶，分解培养基中的酶底物茜素-β-D-半乳糖苷(Aliz-gal)，使茜素游离，并与培养基中的铝、钾、铁、铵离子结合形成紫色(或红色)的螯合物，使菌落呈现相应的颜色。

二、培养基配方（g/L）：

胰酪胨	20.0
氯化钠	5.0
磷酸氢二钾	2.75
磷酸二氢钾	2.75
月桂基硫酸钠	0.1
异丙基硫代半乳糖苷	0.03
硫酸铝钾	0.5
柠檬酸铁铵	0.5
琼脂	15.0
茜素-β-D-半乳糖苷	0.05
pH 7.1±0.1	25℃

三、试验方法：

1、称取本品46.7g，加热溶解于1000ml蒸馏水中，116℃高压灭菌10分钟，冷却至50℃左右时，倾入无菌平皿，备用。

2、制备好的平板保存于2-8℃，应避免光线直接照射。干燥培养基应放置于阴暗干燥处，室温保存。

4、使用前，把制备好的平板放置室温10-20分钟。

5、制备质控菌液。选择合适稀释度的质控菌液0.1ml，均匀涂布于平板上，每一稀释度接种两个平板。用1μL接种环取非目标菌质控菌液1环，将接种环接触容器边缘3次去除多余液体，在平板表面划六条平行直线，同时接种两个平板。36±1℃℃倒置培养基培养18-24小时，记录实验结果。

四、结果观察与解释

接种以下质控菌株，36±1℃需氧培养18-24小时：

质控菌株	菌株编号	接种量(CFU)	参比或计数培养基	方法	质控评定标准	其他特征
金黄色葡萄球菌	ATCC6538	/	/	半定量	G≤1	/
伤寒沙门氏菌	ATCC14028	/	/	定性	-	粉色菌落
大肠埃希氏菌	ATCC25922	20-200			PR≥0.5	紫红色菌落
阴沟肠杆菌	ATCC23355	20-200	TSA	定量	PR≥0.5	紫红色菌落
弗氏柠檬酸杆菌	ATCC43864	20-200			PR≥0.5	紫红色菌落

a：大肠埃希氏菌，b:金黄色葡萄球菌，c:伤寒沙门氏菌，d:阴沟肠杆菌，e：弗氏柠檬酸杆菌，f:空白对照

五、注意事项

本培养基仅为细菌鉴定的一部分，需做其他补充试验。

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