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茜素-β-半乳糖苷琼脂原理及实验现象

李令梅
录入时间:2020-7-24 9:50:24 来源:青岛海博生物

一、试验原理:

 

  用于食品、饮料和饮用水中大肠菌群快速检测和计数(GB/T4789.32-2002)。

  胰酪胨提供氮源、维生素和矿物质满足细菌生长的需求;氯化钠可维持均衡的渗透压;磷酸二氢钾和磷酸氢二钾是缓冲剂;月桂基硫酸钠抑制革兰氏阳性菌;大肠菌群可产生β-半乳糖苷酶,分解培养基中的酶底物茜素-β-D-半乳糖苷(Aliz-gal),使茜素游离,并与培养基中的铝、钾、铁、铵离子结合形成紫色(或红色)的螯合物,使菌落呈现相应的颜色。

 

二、培养基配方(g/L):

 

胰酪胨

20.0

氯化钠

5.0

磷酸氢二钾

2.75

磷酸二氢钾

2.75

月桂基硫酸钠

0.1

异丙基硫代半乳糖苷

0.03

硫酸铝钾

0.5

柠檬酸铁铵

0.5

琼脂

15.0

茜素-β-D-半乳糖苷

0.05

pH 7.1±0.1

25℃


三、试验方法:

 

  1、称取本品46.7g,加热溶解于1000ml蒸馏水中,116℃高压灭菌10分钟,冷却至50℃左右时,倾入无菌平皿,备用。

  2、制备好的平板保存于2-8℃,应避免光线直接照射。干燥培养基应放置于阴暗干燥处,室温保存。

  4、使用前,把制备好的平板放置室温10-20分钟。

  5、制备质控菌液。选择合适稀释度的质控菌液0.1ml,均匀涂布于平板上,每一稀释度接种两个平板。用1μL接种环取非目标菌质控菌液1环,将接种环接触容器边缘3次去除多余液体,在平板表面划六条平行直线,同时接种两个平板。36±1℃℃倒置培养基培养18-24小时,记录实验结果。


四、结果观察与解释 

                                         

  接种以下质控菌株,36±1℃需氧培养18-24小时:

质控菌株

菌株编号

接种量(CFU)

参比或计数培养基

方法

质控评定标准

其他特征

金黄色葡萄球菌

ATCC6538

/

/

半定量

G≤1

/

伤寒沙门氏菌

ATCC14028

/

/

定性

-

粉色菌落

大肠埃希氏菌

ATCC25922

20-200



PR≥0.5

紫红色菌落

阴沟肠杆菌

ATCC23355

20-200

TSA

定量

PR≥0.5

紫红色菌落

弗氏柠檬酸杆菌

ATCC43864

20-200



PR≥0.5

紫红色菌落

 

a:大肠埃希氏菌,b:金黄色葡萄球菌,c:伤寒沙门氏菌,d:阴沟肠杆菌,e:弗氏柠檬酸杆菌,f:空白对照


五、注意事项

 

  本培养基仅为细菌鉴定的一部分,需做其他补充试验。

 

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