一、目的要求
1 ．学习并掌握观察放线菌形态的基本方法．
2 ．初步了解放线菌的形态特征，
二、基本原理
放线菌是指能形成分枝丝状体或菌丝体的一类革兰氏阳性细菌，常见放线菌大多佬形成菌嫂体，紧贴培养基表面或深入培养基内生长的叫基内菌钦（简称“基丝”，) ，基丝生长到一定阶段还能向空气中生长出气生菌丝〔 简称“气丝”) ，并进一步分化产生孢子丝及孢子。有的放线菌只产生基稗而无气越。在显微镜下直接观察时，气处在上层、基丝在下层，气理色暗，墓丝较透明．孢子丝依种类的不同，有直波曲、各种螺旋形或轮生．在油镜下观察，放线菌的孢子有球形、椭圆、杆状或柱状．能否产生菌丝体及由菌丝体分化产生的各种形态特征是放线菌分类鉴定的重要依据．为了观察放线菌的形态特征，人们设计了各种培养和观察方法，这些方法的主要目的是为了尽可能保持放线菌自然生长状态下的形态特征．本实狡介绍其中几种常用方法．扦片法：将放线菌接种在琼脂平板上，扦上灭菌盖玻片后培养，使放线菌菌丝沿着培养基表面与盖玻片的交接处生长而附着在盖玻上．观察时，轻轻取出盖玻片，t 于载玻片上直接镜检．这种方法可观察到放线菌自然生长状态下的特征，而且便于观察不同生长期的形态．玻璃纸法；玻璃纸是种透明的半透膜，将灭菌的玻璃纸班盖在琼脂平板表面，然后将放线菌接种于玻璃纸上，经培养，放线菌在玻璃纸上生长形成菌苔，观察时，揭下玻璃纸，固定在载玻片上直接镜检．这种方法既能保持放线菌的自然生长状态，也便于观察不同生长期的形态特征。印片法将要观察的放线菌的菌落或菌谷，先印在载玻片上，经染色后观察．这种方法主要用于观察饱子丝的形态，孢子的排列及其形状等．方法简便、但形态特征可能有所改变，
三、器材
l 菌种 细黄链霉菌或青色链霉菌．弗氏链霉菌。
2 ，培养基 灭菌的高氏I 号琼脂
3 ．仪器或其他用具 经灭菌的：平皿、玻璃纸、盖玻片、玻璃涂棒，以及载玻片，接种环，接种铲，镊子，石炭酸复红染液，显微镜等。
四、操作步骤
1.扦片法
( 1 ）倒平板 取融化并冷至大约50 ℃ 的高氏1 号琼脂约20 而倒平板，凝固待用．
（2）接种用接种环挑取菌种斜面培养物（孢子）在琼脂平板上划线接种．
（3）扦片以无菌操作用镊子将灭菌的盖玻片以大约45 。角扦人琼脂内（扦在接种线上），扦片数量可根据需要而定，
( 4 ）培养将扦片平板倒置，28 ℃ 培养，培养时间根据观察的目的而定、通常3 ~5d ．
( 5 ）镜检 用镊子小心拔出盖玻片，擦去背面培养物，然后将有菌的一面朝上放在载玻片上，直接镜检．
2 玻璃纸法
( l ）倒平板 同扦片法．
( 2 ）铺玻璃纸 以无菌操作用镊子将已灭菌（155～160 ℃ 干热灭菌2h ）的玻璃纸片（似盖玻片大小）铺在培养签琼脂表面，用无菌玻璃涂棒（或接种环）将玻璃纸压平，使其紧贴在琼脂表面，玻璐纸和琼脂之间不留气泡。每个平板可铺5 ~ 10 块玻璃纸．
也可用略小于平皿的大张玻璃纸代替小纸片，但观察时需要再剪成小块．
( 3 ）接种 用接种环挑取菌种斜面培养物（孢子〕 在玻璃纸上划线接种．
( 4 ）培养 将平板倒里，28 ℃ 培养3~5d .
（5）镜检 在洁净载玻片上加一小滴水，用摄子小心取下玻璐纸片，菌面朝上放在玻片的水滴上，使玻璃纸平贴在玻片上（中间勿留气泡），先用低倍镜观察，找到适当视野后换高倍镜观察。
操作过程，勿碰动玻璃纸面上的培养物．
3 ．印片法
( 1 ）接种培养 用高氏I 号琼脂平板，常规划线接种或点种，28 ℃ 培养4 ~ 7 d ．也可用上述两种方法所使用的琼脂平板上的培养物，作为制片观察的材料．
( 2 ）印片 用接种铲或解剖刀将平板上的菌苔连同培养基切下一小块，菌面朝上放在一载玻片上．另取一洁净载玻片里火焰上微热后，盖在菌苔上。轻轻按压，便培养物（气性、孢子丝或孢子）枯附（“印”）在后一块载玻片的中央，有印迹的一面朝上，通过火焰2 ~3 次固定．
( 3 ）染色用石炭酸复红覆盖印迹，染色约1min后水洗．
（4）镜检 干后用油镜观察．
五、实验报告
! ．结果
绘图说明你所观察到的放线菌的主要形态特征．
2 ．思考题
( l) 试比较三种培养和观察放线菌方法的优缺点。
( 2 ）玻璃纸培养和观察法是否还可用于其他类群微生物的培养和观察？为什么？
（3）镜检时，你如何区分放线菌的基内菌丝和气生菌丝？
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