二、细胞数的测定
测定细胞数目的方法很多,下面介绍几种常用的方法:
1、显微直接计数法
在显微镜下直接进行计数,常利用血球计数板进行计数。血球计数板是一块特制
的载玻片。计数在载玻片上的计数室内进行。由于其体积一定(0.1mm8),而且菌液浓度已知,这样计数出来 的数字,通过换算,可测知样品里单位体积中的微生物总数目。该方法的优点是直观、快速,但死活不分,测定出来的结果是总菌数。
在条件较差的地方,如果没有血球计数板,也可以采用定面积涂布法或比例计数法来测定总菌数,其中又以比例计数法较为简便。它是将待测细菌菌液与等体积血液混合涂片,在显微镜下测得细菌数与红细胞数的比例。由于每毫升血液中红细胞数是已知的,根据比例可大致测知样品中的细菌数。
2、平板菌落计数法
平板菌落计数法是实践中最常用的一种方法。它的做法是:将稀释后的一定量的已知浓度的菌液与熔化的固体培养基混合( 45摄氏度左右 ),摇匀、静置、凝 固、培养,然后计数其菌落数目。一般情况下,认为每个菌落代表一个活菌,这样换算以后可测知样品中活菌数目。这个方法常用来测定牛乳、食品、水及其他材料中的含菌数。有些细菌如无法在固体培养基 内生长或有其他原因,可用液体稀释法,借助于统计学也可判断其活菌数。“最可能数目MPN是统计法在生物学的应用。通过查MPN可测知样品中活菌的可能数目。
3、薄膜过滤计数法
这种方法适用于测定量大但含菌数少的样品,如水、空气等。水等样品通过微孔薄膜(如硝化纤维素薄膜)过滤后,将黏附有细菌的膜放在培养基表面或浸透了培养液的支持物表面,进行培养,然后计数菌落来推算样品中的含菌量。
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