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革兰氏染色液原理及实验现象

王永兴
录入时间:2020-10-15 10:49:48 来源:青岛海博生物

一、试验原理:


  用于细菌的革兰氏染色试验。

  通过结晶紫初染和碘液媒染后,在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物,革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密,故遇乙醇或丙酮脱色处理时,因失水反而使网孔缩小,再加上它不含类脂,故乙醇处理不会出现缝隙,因此,能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内,使其仍呈紫色;而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差,在遇脱色剂后,以类脂为主的外膜迅速溶解,薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出,因此通过乙醇脱色后仍呈无色,再经沙黄等红色染料复染,就使革兰氏阴性菌呈红色。


二、培养基配方(g/L):


  革兰氏染色液A液:

结晶紫 1.0g

95%乙醇

20.0ml

51%草酸铵水溶液 

80.0ml

  革兰氏染色液B液

1.0g

碘化钾

2.0g

蒸馏水

300ml

  革兰氏染色液C液

95%乙醇

  革兰氏染色液D液

沙黄

0.25g

95%乙醇  

10.0ml

蒸馏水

90.0ml


三、试验方法:


  1.如果样品来自肉汤培养物:挑取1-2环肉汤培养基至洁净载玻片上,不需要涂布开,在空气中自然干燥样品液。如果样品来自平板培养物:用接种环挑取1环蒸馏水至洁净载玻片上,挑取一个单菌落,与蒸馏水混合均匀,涂布于载玻片上,尽可能涂布均匀,且不要太厚,空气中自然干燥菌液。

  2. 涂布经火焰固定,加(结晶紫溶液)溶液A染1分钟,水洗。

  3. 加(碘液)溶液B染色1分钟,水洗。

  4. 加(脱色液)溶液C,不时摇动载玻片约10-30秒,至无紫色脱落为止,水洗。

  5:加(复染液)溶液D,染1分钟,水洗。

  6:干后油镜镜检。革兰氏阳性菌呈暗紫色至紫色,革兰氏阴性菌呈红色至淡红色。


四、结果观察与解释


  接种以下质控菌株:

质控菌株

菌株编号

实验结果

镜检菌落颜色

金黄色葡萄球菌

ATCC25923

G+

紫色

大肠埃希氏菌

ATCC25922

G-

红色


  革兰氏染色液微生物质控结果:


五、注意事项


  本培养基仅为细菌鉴定的一部分,需做其他补充试验。

 

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