一、参考标准
根据《GB4789.38-2012 大肠埃希氏菌计数》中定义，大肠埃希氏菌广泛存在于人和温血动物的肠道中，能够在44.5℃发酵乳糖产酸产气，IMViC（靛基质、甲基红、VP试验、柠檬酸盐）生化试验为＋＋－－或－＋－－的革兰氏阴性杆菌。
二、生化验证
1、从分离平板中挑取可疑菌落，接种至乳糖发酵培养基（或EC肉汤培养基），44.5℃培养24h，观察实验结果。典型的大肠埃希氏菌在乳糖发酵培养基中产酸产气，培养基由紫色变为黄色，导管中有气体，有时液面处可见大量气泡（在EC肉汤中可观察到导管内有气体产生）。
乳糖发酵培养基试验现象
备注：a为大肠埃希氏菌ATCC25922，b为乙型副伤寒沙门氏菌，c为大肠埃希氏菌CMCC44102，d为空白对照
2、从分离平板中挑取疑似菌，进行IMViC生化实验，接种至蛋白胨水、MR-VP、西蒙氏枸橼酸盐培养基（可选用大肠杆菌鉴定条或成套生化鉴定管等），36±1℃培养24-48h，记录生化反应结果。大肠埃希氏菌IMViC试验为＋＋－－或－＋－－（大多数大肠埃希氏菌反应为＋＋－－，－＋－－反应的大肠埃希氏菌较为少见）。
注：靛基质试验需在培养结束后，在蛋白胨水中滴加靛基质试剂，立即或数秒内出现玫红色环为阳性反应，黄色环为阴性反应；甲基红试验需在培养结束后，在MR-VP培养基中滴加甲基红试剂，立即显红色为阳性反应，橙黄色为阴性反应；V-P试验需在培养结束后滴加V-P试剂，继续培养0.5-4h，如出现变红现象即为阳性反应，不变红为阴性反应；西蒙氏枸橼酸盐可直接观察结果，如出现变蓝即为阳性反应，不变色为阴性反应。
3、革兰氏染色。在挑取疑似菌落后对其疑似菌落进行革兰氏染色（革兰氏染色液方法 点击查看相关文章），大肠埃希氏菌为革兰氏阴性杆菌，革兰氏染色结果为红色短杆菌。
革兰氏染色液微生物质控结果
备注：红色杆菌为大肠埃希氏菌，紫色球菌为金黄色葡萄球菌
三、结果判定
若待测菌能够在44.5℃发酵乳糖产酸产气，并且同时满足IMViC（靛基质、甲基红、VP试验、柠檬酸盐）生化试验为＋＋－－或－＋－－的革兰氏阴性杆菌，即可判定为大肠埃希氏菌。
四、注意事项
极少数不活跃大肠埃希氏菌为乳糖迟缓发酵或不发酵类型，在乳糖发酵培养基或EC肉汤培养基中观察不到产酸产气现象，需结合其他生化反应进行判断。
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