一、实验原理:
本培养基用于霍乱弧菌的生化试验(SN标准)
牛肉粉、酵母粉、月示蛋白胨、蛋白胨提供氮源、维生素和矿物质,乳糖、葡萄糖是可发酵的糖,氯化钠维持均衡的渗透压,琼脂是培养基的凝固剂。
二、培养基配方(g/L):
成分 |
用量 |
|
牛肉粉 |
3.0 |
|
酵母粉 |
3.0 |
|
月示蛋白胨 |
15.0 |
|
蛋白胨 |
5.0 |
|
乳糖 |
5.0 |
|
葡萄糖 |
1.0 |
|
硫酸亚铁 |
0.2 |
|
氯化钠 |
20.0 |
|
硫代硫酸钠 |
0.3 |
|
琼脂 |
12.0 |
|
酚红 |
0.024 |
|
pH7.2-7.6 |
25℃ |
三、实验方法:
称取本品 64.5g,加热溶解于1000ml 蒸馏水中,分装于试管内的 3/4 左右高度,121℃高压灭菌 15 分钟,放置高层斜面备用。
四、结果观察与解释
按标签用法制备培养基,接种以下质控菌株,放置36±1℃需氧培养18-24小时。
质控菌株 |
菌株编号 |
接种量(CFU) |
生长情况 |
其它特征 |
霍乱弧菌非01群 |
HB081127A-1 |
/ |
+++ |
K/A,H2S(-),产气(-) |
副溶血性弧菌 |
ATCC17802 |
/ |
+++ |
K/A,H2S(-),产气(-) |
溶藻弧菌 |
ATCC17749 |
/ |
+++ |
K/A,H2S(-),产气(-) |
大肠埃希氏菌 |
ATCC25922 |
/ |
+++ |
A/A,H2S(-),产气(+) |
鼠伤寒沙门氏菌 |
ATCC14028 |
/ |
+++ |
K/A,H2S(+),产气(+) |
普通变形杆菌 |
ATCC13315 |
/ |
+++ |
K/A,H2S(+),产气(+) |
实验结果现象与说明:
1.霍乱弧菌非01群、副溶血性弧菌、溶藻弧菌
斜面红/底层黄:发酵葡萄糖但不发酵乳糖,是不发酵乳糖的特征的菌类。
2.大肠埃希氏菌
斜面黄/底层黄:既发酵乳糖也发酵葡萄糖,产生大量的酸使整个培养基呈黄色,同时有产气现象。
3.鼠伤寒沙门氏菌、普通变形杆菌
斜面红/底层黄(部分区域黑色):发酵葡萄糖但不发酵乳糖同时产生硫化氢,是产硫化氢不发酵乳糖特征。
硫化氢的产生:这类菌能分解含硫氨基酸,生成硫化氢,硫化氢和培养基中的铁盐反应生成黑色的硫化亚铁沉淀。
五、注意事项
能产生硫化氢的菌应及时观察试验结果,以免生成的硫化铁形成黑色区域,遮盖斜面与底层的颜色影响判断结果。
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