一、培养基用途
用于金黄色葡萄球菌耐热核酸酶的检测。金黄色葡萄球菌是引起人、畜患病的常见的病原体之一，同时也是食品等检验标准的重要监测病原体之一。而耐热核酸酶是产肠毒素金黄色葡萄球菌生长的一个典型特征，是检测金黄色葡萄球菌污染的标志特征之一。
二、培养基成分及使用方法
1、培养基成分
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成分 |
含量（g/1000mL） |
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脱氧核糖核酸（DNA） |
0.3 |
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氯化钙 |
1.1 |
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氯化钠 |
10.0 |
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三羟甲基氨基甲烷（Tris） |
6.1 |
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琼脂 |
10.0 |
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pH 9.0±0.1 |
25℃ |
2.使用方法
称取本品27.58g，加热溶解于1000ml蒸馏水中，煮沸溶解后冷却至合适温度，倾入无菌平板。
三、实验原理
产肠毒素的金黄色葡萄球菌可产生胞外热稳定DNA酶，在沸水中水浴15min后仍可保持活性，水解DNA长链形成数个单核苷酸组成的寡核苷酸链，使甲苯胺蓝由蓝色变成粉红色；氯化钙提供阳离子作为激活剂；氯化钠维持均衡的渗透压；三羟甲基氨基甲烷为缓冲剂；琼脂为培养基的凝固剂。
四、实验方法及结果
1、按使用方法制备培养基，在琼脂上打成直径2mm的小孔，抽出小孔中的琼脂。
2、每个小孔加入约0.01ml水浴处理（在水浴中煮沸15min）后的可疑菌的肉汤培养物。
3、将平板正置于培养箱中，36℃±0.1培养4小时。阳性反应为在小孔周围形成至少扩展约1mm的粉红色的晕圈。
4、金黄色葡萄球菌有粉红色晕圈，如图1-a、1-b所示；大肠埃希氏菌无粉红色晕圈，如图1-c所示。
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a:金黄色葡萄球菌ATCC6538，b:金黄色葡萄球菌ATCC25923，c:大肠埃希氏菌ATCC25922 图1 甲苯胺蓝-DNA琼脂的微生物结果 |
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五、注意事项
1、配置培养基时，如不能立即使用可分装三角瓶，121℃高压灭菌15min，灭菌后的培养基可于室温存放4个月无变化。使用时加热融化倾注平板，此培养基经数次融化后仍可使用。
2、每个平板打孔数量可根据实际情况增减，但需预留出晕圈范围，以防打孔位置过近影响阴阳性判断。
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