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浅谈无菌室洁净度检测与灭菌方式

李令梅
录入时间:2021-2-1 14:01:53 来源:青岛海博生物

  

  无菌室在消毒处理后,无菌试验前及操作过程中需检查空气中菌落数,以此来判断无菌室是否达到规定的洁净度,常用沉降菌法。一般无菌室的空间洁净度要求达到10000级,万级洁净度对空间菌落的要求是:静态检测,自然沉降菌CFU/皿;操作区域如超净工作台、生物安全柜里需要达到洁净度100级,百级洁净度对空间菌落的要求是:静态检测,自然沉降菌CFU/皿。


一、沉降菌检测方法


  以无菌方式将3个营养琼脂平板带入无菌操作室,在操作区台面左、中、右各放1个;打开平板盖,在空气中暴露30min后将平板盖好,置36℃士1℃培养48h,取出计数。


二、无菌室的灭菌方式


  1、紫外线照射


  紫外线灭菌是利用适当波长的紫外线破坏微生物机体细胞中的DNA或RNA结构,造成生长性细胞死亡来达到灭菌效果,属于一种物理方式的灭菌。该方法可以杀灭各种微生物,包括细菌、病毒、真菌、立克次体及支原体等,是实验室中最常用的灭菌方式。根据2002年国家卫生部发布的《消毒技术规范》,紫外灯的要求是紫外强度不得低于70uW/c㎡(紫外灯1m处),空间内的紫外灯布局要求每㎡不少于1.5W。并做到定期(至少每年1次)更换新的紫外灯管,以确保紫外灯管灭菌持续有效。


  2、臭氧灭菌


  臭氧是一种强氧化剂,通过氧化分解细菌内部葡萄糖所需的酶,使细菌灭活死亡。使用臭氧灭菌,杀菌彻底,无残留,杀菌广谱,可杀灭细菌繁殖体和芽孢、病毒、真菌等,并可破坏肉毒杆菌病毒。另外,臭氧对霉菌有极强的杀灭作用。用臭氧消毒空气,必须是在封闭空间,且室内无人条件下进行,消毒后至少30min才能进入。一般灭菌时间选择30min即可,要求空间中臭氧浓度不低于20mg/m3。


  3、化学熏蒸


  采用易挥发气化的化学物质的蒸汽,对空间微生物进行杀灭的目的,常用甲醛、过氧化氢、过氧乙酸等。这种方法明显的缺点是易残留,对人体伤害大。每次熏蒸后,至少需要通风24h才可以使用。所以只有在其他灭菌方法无法达到理想的灭菌效果时,才会考虑这种方法。


  无菌室作为微生物检测的空间,每一个质检员都要了解它的状态,才能保证实验结果的准确度。

 

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