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抗生素检定培养基I号(低pH)实验及注意事项

赵宇
录入时间:2021-3-29 11:08:38 来源:青岛海博生物

一、用途


  本产品符合中国药典标准,用于磺苄青霉素效价测定。


二、检验原理


  本法是利用抗生素在琼脂培养基内的扩散作用,抑菌圈直径与抗生素的浓度或活性相关;比较标准品与供试品两者对接种的试验菌产生抑菌圈的大小,以测定供试品效价的一种方法。


三、培养基配方(g/L)


蛋白胨

5.0

牛肉浸粉

3.0

磷酸氢二钾

3.0

琼脂

15.0

pH值6.5-6.6

25℃

此配方可以进行改良或增加营养成分以获得最佳的结果


四、操作步骤


  1、称取本品26.0g,加热搅拌溶解于1000ml纯化水中,116℃高压灭菌20分钟,备用;


  2、菌悬液的制备。枯草芽孢杆菌(CMCC(B)63501):取枯草芽孢杆菌(CMCC(B)63501)的营养琼脂斜面培养物,接种于盛有营养琼脂培养基的培养瓶中,在35-37℃培养7日,用革兰氏染色法涂片镜检,应有芽孢85%以上。用灭菌水将芽孢洗下,在65℃加热30分钟,备用;


  3、取平板分别注入加热融化的培养基20ml,放置水平台面上使凝固,作为底层。另取培养基适量培养基,放冷至48-50℃加入规定的试验菌悬液适量,摇匀。在平板中分别加入5ml,使在底层上均匀摊布,作为菌层,放置在水平台上冷却凝固。


  4、在平板中放置牛津杯。用无菌镊子夹住HB四连式牛津杯正面的凸点,将其放置在菌层培养基表面上,如图1;将压杯板盖上,压住牛津杯5秒左右,使4个小杯与培养基表面紧密接触,防止出现缝隙导致漏液,然后小心拿走压杯板。如图2。



图1 图2

  

  5、在每一平板中小管中分别滴加标准品溶液,如图3;转移至培养箱35-37℃培养14-16小时,记录实验结果。如图4。



图3 图4


五、微生物试验


  接种以下质控菌株,在36±1℃培养14-16小时:

质控菌株

菌株编号

接种量(CFU)

生长情况

其他特征

枯草芽孢杆菌

CMCC(B)63501

/

+++

抑菌圈大小18mm-22mm


  抗生素检定培养基I号(低pH)质控结果:


六、注意事项


  1、注入培养基总量不大于20ml,否则放置牛津杯后平皿盖无法盖紧。


  2、菌量浓度适宜,若菌量浓度过小,则菌层生长弱做不出抑菌圈。


  3、菌层培养基表面一定要平整,否则会导致牛津杯漏液。


  4、HB四连式牛津杯中央有凸点且平衡翼上标有“海博生物”字体的为产品正面。


  5、压杯板已经辐照灭菌,可以直接使用;多次使用,可用酒精棉擦拭即可。


  6、将平皿转移至培养箱培养过程中轻拿轻放,避免剧烈震动,不要堆置培养,以免影响实验效果。

 

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