PYG液体培养基的原理及实验方法

一、培养基用途

 该培养基主要用于双歧杆菌的增菌培养。

二、培养基配方（g/L)

三、检验原理

 蛋白胨、酵母浸粉提供氮源、维生素和生长因子；葡萄糖为可发酵糖类；半胱氨酸盐酸盐、维生素K1、氯化血红素、硫酸镁、氯化钙、氯化钠、碳酸氢钠为培养各种双歧杆菌提供生长因子；磷酸氢二钾、磷酸二氢钾为缓冲剂。

四、试验方法

 1.称取本品18.04g，加热溶解于500ml蒸馏水中，121℃高压灭菌15分钟，冷至50℃左右时，加入过滤除菌的维生素K1溶液0.5ml和氯化血红素溶液(5mg/ml)2.5ml，混匀，备用。

 2.在无菌环境中，用10ml移液枪吸取备用的PYG液体培养基加到无菌空试管中，每支10ml，共六支。

 3.将质控菌株稀释至合适梯度，用移液枪吸取质控菌种100微升，加到分装好的试管中，并立即在试管中加入适量无菌液体石蜡。

 4.将培养基放置于36±1℃厌氧环境中培养48小时，观察和记录实验结果。

五、试验结果

 接种以下质控菌株，放置于36±1℃厌氧环境中培养48小时。

 PYG液体培养基试验结果：

a:长双歧杆菌b:婴儿双歧杆菌c：空白对照

六、注意事项

 1.双歧杆菌为厌氧菌，稀释质控菌株到试验完成，整个过程控制在15min之内。

 2.双歧杆菌为厌氧菌，在液体培养基中接入质控菌种后应加入适量无菌液体石蜡以隔绝空气或放入其他厌氧环境中。

 3.维生素K1溶液配制方法:称取维生素K1 1g，加入无水乙醇99ml，过滤除菌。氯化血红素溶液配制方法:称取氯化血红素0.5g溶于1mol/L氢氧化钠溶液1ml中加蒸馏水至100ml，121℃高压灭菌15min-20min，冰箱保存。  

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