用于酵母繁殖和筛选的培养基

   
   用于酵母繁殖和筛选的培养基
　
 
注意：有关标记<!>符号的材料的恰如其分的操作见附录12。
重要：在所有配方中使用蒸馏去离子水。除非另有说明，培养基和溶液在15 psi(1.05kg／cm2)高压下蒸汽灭菌15-20min。
 
完全基本培养基（CM）或合成完全培养基（SC）和营养缺陷型培养基
为了确定菌株生长的必需条件，采用相应的营养缺陷型培养基是非常有用的。培养基补料的干粉是各自分开保存的，可以方便地配制相应的营养缺陷型培养基。CM(或SC)是含有所有生长成分的培养基(也就是说，没有一种营养成分缺陷)。
无氨基酸酵母氮源（市售的无氨基酸酵母氨源(YNB)分含硫酸胺和不含硫酸胺两种。此配方所用YNB系含硫酸胺的。如果你手头的YNB不含硫酸胺，则只加1.7g YNB，另加5g硫酸胺即可。）    6.7g
葡萄糖    20g
琼脂粉    20g
营养缺陷混合物    2g
H2O    to 1000 ml
 
营养缺陷混合物(Drop-out Mix)
减去有关的补料，  混合适当的成分，在密封的容器中混合。来回倒置转动容器至少15 min；加入几粒干净的大理石，以助于固体的混合。
腺嘌呤(Adenine)    0.5g
丙氨酸(Alanine)    2.0g
精氨酸(ArSinine)    2.0g
天冬酰胺(Asparagine)    2.0g
天冬氨酸(AsPanic acid)    2.0g    
半胱氨酸(Cysteine)    2.0g
谷氨酰胺(Glatamine)    2.0g
谷氨酸(Glutsmic acid)    2.0g
甘氨酸(GIycine)    2.0g
组氨组(Histidine)    2.0g
肌醇(Inositol)    2.0g
异亮氨酸(Isoleucine)    2.0g
亮氨酸(Leudne)    10.0g
赖氨酸(Lysine)        2.0g
甲硫氨酸(Methionine)    2.0g
对氨基苯甲酸(para-Aminobenzoic acid)  0.2g
苯丙氨酸(Phenylalanine)    2.0g
脯氨酸(Proline)    2.0g
丝氨酸(Serine)    2.0g
苏氨酸(Threonine)    2.0g
色氨酸(Tryptophan)    2.0g
酪氨酸(Tyrosine)    2.0g
尿嘧啶(Uracil)    2.0g
缬氨酸(Valine)    2.0g
摘录于Adams等人(1998)的资料。
 
    表A2.3  补加基本培养基的成分
成分
 贮存液浓度／(g／100ml)
 1L中所加贮存培养基的体积／ml
 培养基中最终浓度／(mg／L)
 涂布在乎板上所需贮存液的体积／ml
 
腺嘌呤硫酸盐
 0.2a
 10
 20
 0.2
 
尿嘧啶
 0.2a
 10
 20
 0.2
 
L—色氨酸
 1
 2
 20
 0.1
 
l—组氨酸HCl
 1
 2
 20
 0.1
 
L—精氨酸LiCl
 1
 2
 20
 0.1
 
L—甲硫氨酸
 1
 2
 20
 0.1
 
L—酪氨酸
 0.2
 15
 30
 0.2
 
L—亮氨酸
 1
 10
 109
 0.1
 
L—异亮氨酸
 1
 3
 30
 0.1
 
L—赖氨酸HCl
 1
 3
 30
 0.1
 
L—苯丙氨酸
 1a
 5
 50
 0.1
 
L—谷氨酸
 1a
 10
 100
 0.2
 
L—天冬氨酸
 1a,b
 10
 100
 0.2
 
L—缬氨酸
 3
 5
 150
 0.1
 
L—苏氨酸
 4a,b
 5
 200
 0.1
 
L—丝氨酸
 8
 5
 400
 0.1
 
注：a:室温保存；b:培养基高压灭菌后再加入。
 
补加的基本培养基(SMM)
SMM是加入各种生长补料的合成葡萄糖基本培养基(SD)。这些溶液可长期存放。某些溶液应在室温保存以防发生沉淀，而其他的溶液可能需要冷冻。无论如何，应优先选用氨基酸的盐酸盐。 
将适当体积的贮存液加到SD培养基的配料中以配制培养基，而后用蒸馏水调节终体积至1L。高压灭菌后分别加苏氨酸和天冬氨酸溶液。
通常方便的配制SMM培养基的替代办法是，将少量补料涂布在SD平板的表面。补料液在平板上完全干燥后再接种酵母菌。
表A2-3给出了贮存液的浓度，配制1L培养基所需的贮存液的体积，涂在SD平板上所需贮存液的体积以及在SMM中每种成分的最终浓度。
合成的葡萄糖基本培养基（SD）
SD是含有盐类、微量元素、维生素、氮源(不含氨基酸的酵母氮碱)和葡萄糖的合成基本培养基。
不含氨基酸酵母氮源（见CM配方说明）    6.7g
葡萄糖    20g
细菌培养用琼脂    20g
加水    ~1000ml
用于酵母的X-gal指示平板
因为在SD培养基的正常酸性pH条件下，5—溴—4—氯—3—吲哚—p—D—半乳糖苷(X—gal<!>)对酵母菌不起作用，故使用中性pH的培养基。这种选择完全是一种权宜之计。因为许多酵母菌株在中性pH时生长不好。为配制每升X-gal指示平板，需制备下述溶液。
溶液I
10×磷酸缓冲液贮存液    100ml
1000×无机盐贮存液(见下面配方)    1ml
drop-out混合物(见上述)    2g
如果培养基中含有葡萄糖，用蒸馏水调节体积至450ml；若培养基中含有半乳糖，用蒸馏水调节体积400 ml。
l0×磷酸缓冲液贮存液
KH2PO4(1 mol／L)    136.1 g
 (NH4)2SO4(0.15 mol几)    19.8 g
KOH(0.75mol／L)(!)    42.1 g
加水至1 000ml
调pH值至7.0并高压灭菌。
1000×无机盐贮存液
FeCl3(2mmol／L)    32mg
MgSO4·7H2O(0.8 mol／L)    19.72g    
加水至100ml
高压灭菌并贮存备用。这种溶液会出现细小的黄色沉淀，用前应重新悬浮。
 
溶液Ⅱ
在一个2L的烧瓶中混合：
细菌培养用琼脂    20g
蒸馏去离子水    500ml
·溶液I和溶液Ⅱ分开高压。
·冷却至65℃以下时将下述成分加到溶液I中：
    葡萄糖或其他糖类加至终浓度为2％
    X-gal(20mg／ml，  用二甲基甲酰胺<!>溶解)  2ml
    100×维生素贮存液    10ml
.这时包含任何其他的热敏感补料。
.将溶液I和溶液Ⅱ混合在一起，每个平板铺30ml左右。
    100×维生素贮存液
    维生素B1(硫胺素)(0.04 mg／m1)    4 mg
    生物素(2／ug／ml)    0.2mg
    维生素B6(0.04 mg／ml)    4mg
    肌醇(0.2mg／ml)    20mg
    维生素B3(泛酸)(0.04mg／ml)    4mg
    H2O    100 ml
    用0.22／lm的滤器过滤除菌。
 
用于在滤膜上裂解酵母细胞的X-gal平板
这些平板是用来检测在Whatman 3MM滤纸上裂解和固定的细胞中的β-半乳糖苷
酶的活性。
细菌培养用琼脂    20g
1 mol／L Na2HPO4  57.7 ml
1 mol/L NaH2PO4 42.3 ml
MgSO4    0.25 g
H2O    900 ml
高压灭菌后，加6ml X-gal溶液(20mg／ml，用二甲基甲酰胺配置)。
 
YPD(YEPD)培养基
YPD是用于酵母常规生长的复合培养基。
酵母提取物    10g
蛋白胨    20 g
葡萄糖    20g
加水至    1000 ml
制备平板时，在高压灭菌前加入20 g细菌培养用琼脂(终浓度为2％)。
 

 

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