硝酸盐还原试验的简单介绍

张文慧
录入时间:2021-8-31 14:36:30 来源：青岛海博生物

一、培养基用途：

以HB0277硝酸盐肉汤为例，该培养基用于蜡样芽孢杆菌的硝酸盐还原试验。

二、培养基成分及使用方法：

1.培养基成分：

成分	含量（g/1000mL）
蛋白胨	5.0
牛肉浸粉	3.0
硝酸钾	1.0
pH（25℃）7.0±0.1

2.使用方法：
称取本品 9.0g，加热溶解于1000ml蒸馏水中，分装试管，每管5mL（观察产气需加小倒管），121℃高压灭菌15min。

此培养基需配套HB8282硝酸盐还原试剂使用。

三、原理：

蛋白胨和牛肉粉提供碳源、氮源、维生素和生长因子；某些细菌可利用硝酸盐产亚硝酸盐、氨或氮气。滴加硝酸盐还原试剂后若试验菌培养物中有亚硝酸盐，可与乙酸、对苯氨基苯磺酸和α-萘酚反应生成红色的N-α-苯胺偶氮苯磺酸。若试验菌可利用硝酸盐产亚硝酸盐进一步转化为氮气，则小倒管中会有气体囤积，判定为阳性。若试验菌可将亚硝酸盐转化为氨，则滴加硝酸盐还原试剂呈无色反应，此时需加入适量锌粉证明培养物中是否有未被利用的硝酸盐存在，若加入锌粉后为无色则证明无硝酸盐，则可判断为阳性。试验菌不利用硝酸盐，滴加硝酸盐还原试剂后为无色，加入锌粉后变为红色，证明培养物中有未被利用的硝酸盐被锌粉还原为亚硝酸盐产生红色反应，此时判断为阴性。

四、实验结果：

按使用方法制备培养基，接种以下质控菌株，在35±1℃需氧培养24±2h。

质控菌株	菌株编号	接种量 (CFU)	参比或计数培养基	方法	生长情况	其他特征
蜡样芽胞杆菌	CMCC63303	>5000	/	定性	+++	+ 红色
大肠埃希氏菌	ATCC25922	>5000	/	定性	+++	+ 红色
铜绿假单胞菌	ATCC27853	>5000	/	定性	+++	+ 产气
单增李斯特氏菌	ATCC219114	>5000	/	定性	+++	- 先无色，加入锌粉后红色

图1-2 硝酸盐还原试验结果

a: 大肠埃希氏菌ATCC25922，b: 铜绿假单胞菌ATCC27853，c:蜡样芽胞杆菌CMCC63303（培养3d），d: 单增李斯特氏菌ATCC19114

五、注意事项：

由于某些菌利用硝酸盐缓慢，可延长时间培养，结果为阳性依然可判定为利用硝酸盐阳性。

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