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粪肠球菌作为一种益生菌，在医学和食品工程领域得到广泛应用。另外，肠球菌为消化道内正常存在的一类微生物，在肠黏膜具有较强的耐受和定植能力，并且是一种兼性厌氧的乳酸菌，与厌氧、培养保存条件苛刻的双歧杆菌相比，更适合于生产和应用。
《GB8538-2016 饮用天然矿泉水：粪链球菌检验》
采用滤膜法，将250mL水样用孔径为0.45μm的滤膜过滤，并将滤膜移至KF链球菌琼脂培养基上，于36℃±1℃恒温箱中培养48h，如果有红色或粉红色菌落生长，需将菌落接种于脑-心浸萃琼脂培养基上做进一步的确证试验，如过氧化氢酶反应为阴性，并能在脑-心浸萃琼脂培养基上于45℃培养后生成菌落，则证实粪链球菌的存在，其检测结果为阳性。
粪链球菌检验程序见图1。
图1 粪链球菌检验程序
使用方法：称取本品69.4g，加热溶解于1000mL蒸馏水中，煮沸至完全溶解，冷却至50-60℃时，加入无菌1% TTC溶液10mL，混匀，倾入无菌平皿，备用。
4.1.2 培养：
将培养皿倒置，在36℃±1℃培养48h。
4.1.3 计数：
粪链球菌菌落在滤膜上呈现大小不等的红色或粉红色菌落。挑取不少于5个（不足5个则全挑）可疑菌落，进行革兰氏染色。镜检观察，粪链球菌应为革兰氏染色阳性球菌，常排列成短链状。根据菌落特征符合情况计数每250mL水样中的典型菌落数。
粪链球菌接种到KF链球菌琼脂平板，培养结果如下图所示：
图2 粪链球菌在KF链球菌琼脂平板上的菌落特征
4.2 确证性试验：粪链球菌接种到脑-心浸萃琼脂培养基斜面，培养结果如下图所示：
A：粪链球菌；B：空白对照；
4.2.2 用接种环从脑-心浸萃琼脂培养基斜面上挑取典型培养物到一片清洁的载玻片上，加几滴新鲜配制的3%过氧化氢到载玻片的涂抹菌苔上，如果没有气泡发生，则显示过氧化氢酶反应为阴性，则菌落可视为可疑粪链球菌，需继续如下的确信过程。如果有气泡发生，则过氧化氢酶反应为阳性，因此菌落不属于粪链球菌，确信试验到此即可停止。
A：金黄色葡萄球菌；B：粪链球菌；
粪链球菌接种到脑-心浸萃液态培养基和胆汁液态培养基中，培养结果如下图所示：
图5 粪链球菌在脑-心浸萃液态培养基和胆汁液态培养基中的生长情况
左：脑-心浸萃液态培养基；右：胆汁液态培养基；
A：粪链球菌；B：空白对照；
4.2.4 转移到上述培养基后，若能够生长繁殖，则结果表示为阳性，证实为粪链球菌。
4.3 结果与报告：根据上述典型菌落的计数（4.1.3）和确证性试验为阳性的结果（4.2），计算每250mL水样中的粪链球菌数量，结果以CFU/250mL计。
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《GB 8538-2016 饮用天然矿泉水检验方法》 点击下载
注:本文属海博生物原创,未经允许不得转载。
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