一、弧菌简介
弧菌是一种可以在温带水环境下发现的细菌属。他们通常具有共同的特征和习性。如：
（1）革兰氏阴性，短小弯曲弧状，无芽孢，多数有鞭毛、菌毛（如图1）；
（2）具有一端单生鞭毛，运动迅速；
（3）多数菌株生长需要2%-3%氯化钠；
（4）最适生长温度为30℃-37℃；
（5）对热敏感，90℃ 1min即可杀死，50℃ 20min或65℃ 5min也可达到杀菌效果；
（6）耐碱怕酸，1%醋酸或50%食醋中1min死亡。
图1 弧菌的显微形态
二、样品处理规定
对于可能含有弧菌的样品的保存和检验，各相关标准均作了规定：
（1）非冷冻样品采集后应立即置7℃～10℃冰箱保存，尽可能及早检验（GB4789.7-2013 食品微生物学检验 副溶血性弧菌检验）；
（2）新鲜样品采集后应于3h内完成检验，若不能在规定时间内完成，则应将样品置于7℃～10℃条件下保存，并尽可能在24h内完成检验（GB4789.44-2020 食品微生物学检验 创伤弧菌检验）；
（3）样品采集后应立即在7℃～10℃保存，24h内检验。如果样品需要冷冻，于-18℃保存，24h内检验。为了最大限度地保证弧菌的存活率，应避免样品与冰直接接触（SN/T 1022-2001 进出口食品中霍乱弧菌检验方法）。
通常来说，样品保存需放在4℃条件下，但弧菌检验标准中，对样品的保存条件，均要求7℃～10℃，特意避开了4℃，这是因为创伤弧菌在4℃条件下极易形成活而不可培养的状态（参考GB4789.44-2020 食品微生物学检验 创伤弧菌检验）。
三、保存温度
基于弧菌对温度的敏感性，实验室在保存弧菌的标准菌株的时候，也要注意温度条件。对于储备菌株，有条件的可以保存在-70℃超低温冰箱中，一般室温指25℃左右，因为白天晚上会有温差，除非有温控设备，否则没办法保证一般环境温度在25℃-28℃之间，其实只要温度不是太高，放在室内环境中短期内是没有问题的。
对于真空冷冻干燥的菌株，未开封状态下于-20℃冰箱中至少可以保存2年。
对于工作菌株，本实验室在长期工作实践中发现，由于冬天室温偏低（不高于10℃），也不利于弧菌的保存。一周内所划平板，尽管也有尚存活的弧菌，但其活力已远不能满足试验可靠性需要，因此为能保证每次试验的可靠性，建议每次接菌都用前一天在3%NaCl TSA平板上划线培养所得的新鲜菌落；为保证试验的连续性，在试验阶段应该每天划平板培养；培养好的平板，用完后直接放回培养箱，当天下午下班前拿出灭菌丢弃。
务必记住，弧菌液体试管和划线后的平板，一定不能放置在4℃冰箱中。
四、纯化培养与菌悬液制备
因为多数弧菌具有嗜盐性，而在无盐的环境中生长不好甚至不生长，因此在培养该菌时，通常需要加入2%-3%的NaCl，而在初步筛选出该菌后进行纯化时，各标准都要求用含3%NaCl的营养琼脂进行纯化，也是基于这个原因。
为方便副溶血性弧菌的鉴定，我公司开发出了副溶血性弧菌鉴定条和嗜盐试验系列生化管（编号分别为HBIS02、GS014、GS015、SN052、GS016），在使用这些产品时，需要挑取纯化的菌落做成菌悬液，再往管中滴加，此时需要注意，务必使用0.85%生理盐水进行菌悬液的制备，而不能用无菌纯净水，并且制成菌悬液后要尽快滴加完毕，否则会影响结果的判定。
试验证明，用生理盐水制备的菌液，放置1h后菌数降低至初始状态的50%左右；而用纯水制备的菌液，放置1小时几乎无活菌。即使稀释后立即涂布，纯水悬液中的菌数也会迅速降至生理盐水稀释液中菌数的10%以下（如图2）。
图2 副溶血性弧菌ATCC 17802用纯水和生理盐水稀释后放置不同时间后的菌数
综上所述，为保证菌种的存活，弧菌菌种应在-70℃超低温保存或室温，一定不能放在4℃环境保存；为保证试验结果的准确性，弧菌鉴定试验中，应该尽量用新鲜的菌板，挑单菌落至无菌生理盐水制成菌液，制成的菌液不宜搁置时间太长，必要时需要重新制备。
相关产品：
HBI副溶血性弧菌生化鉴定条(SN)-点击查看产品详情
10%NaCl胰胨水-点击查看产品详情
8%NaCl胰胨水-点击查看产品详情
6%NaCl胰胨水-点击查看产品详情
3%NaCl胰胨水-点击查看产品详情
相关标准：
GB 4789.7-2013 副溶血性弧菌检验 点击下载
GB 4789.44-2020 食品微生物学检验 创伤弧菌检验 点击下载
SNT1022-2010 进出口食品中霍乱弧菌的检测方法 点击下载
注:本文属海博生物原创,未经允许不得转载。
上一篇：专性厌氧菌的培养方法及注意事项
下一篇：酵母菌的糖发酵试验-杜氏管发酵法
