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猪肺消化液卵黄培养基



录入时间:2022-1-20 14:42:18 来源:现代微生物培养基和试剂手册

【原理】

  猪肺消化液含有支原体生长所需的某些基本营养成分,可代替马丁氏培养基中的猪胃和牛肉浸液;卵黄液与马血清比较,胆固醇、脂蛋白、磷脂等支原体生长促进因子含量更高,而蛋白质含量甚低,以卵黄液作为支原体培作基的添加成分,具有成本低、取材容易、促进生长作用更等优点,而且用于抗原制备时还能减少由支体原吸附蛋白质产生的抗原的非特异性。


【成分】

猪肺消化液
800ml
卵黄液
100ml
100000u/ml青霉素G
5ml
酵母浸液
100ml
50%葡萄糖
20ml
0.4%酚红
5ml

【制法】

  (1)猪肺消化液的制备:鲜猪肺250g,绞碎后加入蒸馏水1000ml,浓盐酸2ml,胃蛋白酶2g,56℃水浴15小时,沸水浴10分钟终止消化,脱脂棉过滤,加蛋白10g, Tris 1g,调至pH7.8,沸水浴15分钟,冷却后滤纸过滤,121℃灭菌15分钟,冷却后备用;

  (2)卵黄液的制备:新鲜鸡蛋洗净蛋壳,75%酒精浸泡15分钟,无菌操作取出卵黄,加玻璃珠摇成匀浆,以pH7.8PBS配成20%(V/V)之悬液,8000rpm离心1小时,取上清液,加青霉素500u/ml,无菌试验检查后分装备用;

  (3)酵母浸液的制备:鲜酵母500g,加蒸馏水1500ml,充分搅拌,80~90℃水浴20分钟,冷却后,8000rpm离心20分钟,取上清液以1molL氢氧化钠调节至pH7.8,再以450nm滤膜除菌过滤,分装备用;

  (4)上述成分按比例混合,加入其余无菌添加成分,最终pH7.8


【用途】

  分离各种人支原体及实验室制备支原体抗原。


【注意事项】

  1.猪肺须优质、新鲜,鸡蛋须新鲜、无污染。

  2.猪肺消化液、卵黄液4℃保存,酵母浸液-20℃保存。

  3.用于肺炎支原体培养时加葡萄糖,而其他人类支原体培养改加0.1%精氨酸。

(第二军医大学长征医院 俞康龙供稿)

 

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