华农3号培养基

【原理】

  本培养基在华农1号培养基基础上又加入新鲜制备的脑心浸液及新鲜骨胶酶消化液制成，在此培养基上猪痢疾密螺旋体生长成较厚的菌苔，适于制备抗原或菌苗之用。

【成分】

  1.浓缩(1.6倍)牛肉浸汁制备:取绞碎新鲜牛肉500g加蒸馏水625ml，冷浸过液，次日煮沸1小时并用蒸馏水补充至原量后，用纱布棉花过滤，灭菌冷却后，贮存于-20℃备用。

  2.浓缩(2.5倍)脑心浸液制备:取切碎牛脑（或绞碎牛心）200g，加蒸馏水160ml，置4~6℃冷浸过夜，次日置45℃水浴1小时，再煮沸30分钟，用蒸馏水补充至原量，以洗净玻璃棉过滤（牛心浸液可用滤纸过滤），再取上述脑浸液40ml,加心浸液50ml即成浓缩2.5倍脑心浸液。经121℃灭菌15分钟，冷却后，贮存于-20℃备用。

  3.浓缩(2.5倍)骨胶消化液制备:取牛的管骨（切断使露出骨髓），软骨和腱（切断）1000g，加蒸馏水800ml,40℃冷浸24小时，高压灭菌（121℃,30分钟～1小时），然后弃骨头，再煮开并用双层纱布过滤去渣，滤液经冷却后，用虹吸法除去油脂，然后置40℃24小时后，再次去脂即成浓缩骨胶液。消化方法如下：将胰酶溶液（结晶胰酶0.5g, NaHCO₃2g，蔗糖0.5g,温蒸馏水74ml，置37℃水浴溶解即成）加入到预热至37℃的400ml骨胶液中，置37℃温箱消化16~48小时（其间振荡数次），再置4℃冰箱过液（此时消化液已不结冻成胶状），然后任沸水浴中煮沸15~20分钟，以停止酶的作用。此消化液经煮沸后显示出在微带淡黄的清亮液体中有白色絮状沉淀，再滤纸过滤后得到微黄色透明清亮的骨胶汁消化液，灭菌待冷后置-20℃贮存备用。

  4.华农3号培养基的配制:将上述各成分（除蒸馏水Spectam牛血外）加温溶解后，以蒸馏水补足至1000ml，调整至pH7.3±0.5,121℃灭菌15分钟后，置温水浴中冷却至50℃左右，加入 Spectam 溶液及无菌脱纤牛血，混匀后，倾注平皿制成5~7mm的平皿培养基备用。

【用途】

  用于大量培养猪痢疾密螺旋体作抗原或生产菌苗。

【注意事项】

  1.本培养基应倾注成5~7mm的琼脂平皿基，在这种较厚的琼脂平皿上猪痢疾密螺旋体生长成较厚菌苔。

  2.如用纯菌种大量制备抗原，培养基中可不加 Spectam 。

  3.用铂耳钓取菌种时，宜在生长丰厚处刮取较多菌种在本培养基上划密线于整个培养基表面，然后置含有冷钯催化剂“105”及 CO₂:H₂=20:80的厌氧罐中培养4~5天，可得到大量的密螺旋体培养物。

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