华农2号培养基

【原理】

  培养基中的牛肉浸汁，胰蛋白胨、䏡及䏡蛋白胨供给猪痢疾密螺旋体(T. I)营养，半胱氨酸为还原剂，可降低培养基的氧化还原电位，使适于T. I生长，刃天青(resazurin)为氧化还原指示剂，对T.I无毒性。它有-51mv的氧化还原电位(E′o)，当E′o低至-110mv或更低时，其颜色由蓝到粉红色到完全无色，再氧化时刃天青变成粉红色而不转变成蓝色。

【成分】

  取经滤纸过滤并于-20℃保存的牛肉浸汁，置温水浴融化，悬浮上述各成分(除半胱氨酸及胎牛血清外)于1L牛肉浸汁内，加温使完全溶解，然后煮沸直至指示剂退色，再稍快通入CO₂遍于整个培养液中使发生气泡，以排除培养液中的氧气，再加入半胱氨酸，待溶解后，调至pH7.0±0.2，然后分装于中试管中，每支9ml，塞上棉塞后，118℃灭菌15分钟，取出后待冷至45℃左右，无菌加入除菌灭活胎牛血清1ml混匀后，马上供接种用。

【用途】

  作猪痢疾密螺旋体和无害密螺旋体的液体培养及生化鉴定用。

【注意事项】

  1.本培养基于灭菌待冷并经加入胎牛血清后，应迅速接种密螺旋体并置厌氧罐中培养。以免放置时间过长，空气中的氧气侵入培养基中(可由指示剂的颜色变化观察到，当液体表面出现粉红色层并逐渐增厚时，说明侵入培养液中的氧逐渐増多)而影响厌氧性密螺旋体的生长。

  2.一次用不完的培养基，则不加胎牛血清，并于灭菌后换上灭菌橡皮塞塞紧后保存。使用前再换上灭菌棉塞。如有一定量的氧气侵入，则重新置水浴中煮沸，再通入除菌无氧二氧化碳于培养基中，使产生气泡以排除培养基中的溶解氧后，再加入胎牛血清后使用。

  3.每支培养基接种密螺旋体时，需用铂耳刮取大量的菌苔接种3~4次，才能保证接种成功并能生长，且于接种后迅速置于含冷钯催化剂“105”及CO₂ : H₂=50:50的厌氧罐中培养。

  4.亦可将接种密螺旋体的试管培养基换以灭菌橡皮塞，并用带针头的大注射器迅速抽出其中空气经密封后，置普通温箱培养。

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