常用染料的溶解方法和注意事项

一、培养基与染料

  培养基（Medium）是供微生物、植物和动物组织生长和维持用的人工配制的养料，一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐（包括微量元素）以及生长素和水等。有的培养基还含有染料、抗菌素、激素和血清等。不同的培养基需要添加的染料不同，常用的染料有中性红、苯酚红、溴甲酚紫、结晶紫、溴麝香草酚蓝、品红、伊红、美兰、孔雀绿等。经常见到有的人在配制培养基的过程中，其他成分都溶解了，最后加染料后，溶解不彻底的情况，结果不得不重新配制，往往重复几次依然找不到原因，既浪费了原料，又耽误了时间，影响试验的顺利进行。本文主要就培养基中染料的溶解方式做简单介绍，希望能给大家提供帮助。

二、染料的分类

  根据染料的溶解媒介，可以将常用染料大致分为3类：水溶性染料、醇溶性染料和碱溶性染料。顾名思义，水溶性染料就是指只用纯水就能完全溶解，形成透明溶液的染料；而醇溶性染料和碱溶性染料则需要分别在醇类或碱性介质中才能进行彻底溶解，如果只用水是不能溶解的（如图1）。生物实验室常见的染料溶解特性相关内容，可参考

  标本常用染料性能简介 http://hopebiol.com/asphtml/refere5953.htm

图1-1 中性红在水中的溶解状态

图1-2 苯酚红在水和稀碱溶液中的溶解状态

图1-3 溴甲酚紫在水和乙醇中的溶解状态

图1 三种染料在不同溶剂中的溶解状态

三、溶解介质对培养基的影响

  经常有人会质疑，如果培养基中加入了过多的非水溶剂（乙醇或碱液），是否会对培养基的性能造成影响，至少会引起培养基的pH值变化。

  首先，在配制染料溶液时，并不是全部的溶剂都用乙醇或碱液，通常只需滴加几滴或几毫升溶剂，让染料充分溶解，分散开以后，再用纯化水定容至所需容量就可以了。

  其次，培养基中染料的添加量是很少的，尤其是做成母液后使用，每升培养基中只需加几毫升甚至更少，引入的乙醇或碱液很少。

  另外，乙醇不会引起培养基pH值变化，少量碱液就算会引起pH稍有影响，配制好了再微调一下就行了。正常配制培养基，也都要用稀酸或稀碱对pH进行调节的。

  综合来看，少量非水溶剂对培养基本身造成的影响可以忽略不计。

四、具体操作

  下面以苯酚红为例，详细说明一下染料溶液的配制过程。

  （1）首先，查一下苯酚红的特性：苯酚红为鲜红至深红色结晶或细小结晶性粉末，在空气中稳定；1g溶于约1300mL水，约350mL乙醇，500mL丙酮；易溶于氢氧化钠或碳酸钠溶液中呈红色，与锌粉共沸褪色；几乎不溶于乙醚和氯仿。

  经确认，该染料为碱溶性染料，准备好稀碱溶液（本实验室通常用1mol/L的NaOH或Na₂CO₃）；

  （2）称量所需染料至玻璃容器（锥形瓶或烧杯），如图2-1；

图2-1 容器中的染料

（3）滴入几滴碱液，轻轻摇晃容器，直至染料均匀分散，无颗粒物，如图2-2；

图2-2 滴入碱液并摇晃后，染料的状态

（4）用纯化水定容至所需容积，摇匀即可备用，如图2-3。

图2-3 溶解好的染料溶液

五、补充说明

  实验过程中常用的染料都可以用上面的方法进行溶液配制。有些染料本身是水溶性的，热水中溶解度更高，可以稍稍加热促进其溶解。但对于需要醇溶或碱溶的染料，如果只用水，即使加热也达不到溶解的目的。所以首先要选对溶剂，这一点非常重要。如果浓度太大，有少量颗粒，还可以借助超声仪进行溶解。

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