抗小鼠免疫球蛋白荧光抗体

【原理】

  小白鼠(包括BALB/C小鼠)是制备病原微生物单克隆抗体最常用的实验动物,以小鼠免疫球蛋白（IgM、IgA、IgG或全球蛋白)作免疫原免疫家兔或其它合适动物,可产生抗小鼠IgG、IgM、IgA和全球蛋白的抗血清。从这些抗血清中提取免疫球蛋白G(IgG)标记上荧光素,即成为抗小鼠IgG的荧光抗体,它们可以和小鼠对任何抗原刺激所产生的抗体特异结合而指示某抗原对应抗体的存在。

【制法】

  (1)分别制备小鼠免疫球蛋白G、M、A(IgG、IgM、IgA)和全γ球蛋白,作为免疫原;

  (2)以上述免疫原分别免疫家兔或其他合适动物,制取抗小白鼠IgG、IgM、IgA和γ球蛋白的抗血清;

  (3)从上述抗血清中提取IgG;

  (4)以荧光素(FITC或TMRITC)标记IgG,经分离纯化鉴定后即可制成4种抗小鼠免疫球蛋白荧光抗体。

【用途】

  主要有两种:

  (1)抗小鼠γ球蛋白荧光抗体用以检测微生物体或其抗原成分免疫小白鼠的抗体滴度变化,观察抗原体液免疫效果,或选择合适的制备单克隆抗体的细胞融合时间。

  (2)抗小白鼠IgG、IgM、IgA和γ球蛋白荧光抗体可用来筛选分泌抗体的融合细胞。一般是先用抗γ球蛋白荧光抗体筛选阳性细胞克隆,形成单克隆抗体后再用抗IgG、IgM和IgA标记抗体确定单克隆抗体的免疫球蛋白类型。此法尤适于颗粒性抗原(如细菌、病毒、立克次体),对于可溶性抗原,一般需将其吸附或结合在固相载体上以作为染色基质。

【注意事项】

  小鼠免疫球蛋白的提取条件与兔、羊等动物不完全相同。尤其要注意盐析用硫酸铵的浓度。

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