【原理】
病原微生物进入动物机体后,在引起动物病变的同时,也引起动物机体的免疫反应,产生相应的抗体。注入灭活微生物或亚感染剂量的微生物或微生物的抗原性成分,动物机体也可以产生免疫反应,产生大量的相对应抗体,这些抗体可以在体外与对应的微生物体发生特异结合。当这些抗体标记上荧光素时,与对应微生物特异结合后就可以在荧光显微镜下清楚地显出发荧光的微生物体。
【制法】
(1)根据微生物种的不同,以亚感染量微生物体,或灭活微生物体,或微生物体的抗原成分作为免疫原,按一定的免疫程序(参阅本书37章)注射实验动物(最常用者为家兔,次为羊,豚鼠、马等),待抗体效价达到符合要求的程度后,即可采血分离制取抗血清。
(2)从上述抗血清中提取免疫球蛋白G(IgG)。
(3)以荧光素标记上述IgG,然后分离纯化签定,制成抗各种微生物或其抗原成分的荧光抗体。
【用途】
主要有3种:
(1)以免疫荧光直接染色法检测各种临床标本中的病原微生物或其抗原成分以作传染病的快速诊断，
(2)对微出物纯培养物作快速血清学鉴定。
(3)分析微生物的抗原成分。
【注意事项】
1.对抗细菌的荧光抗体，F/P克分子比可以高于2,这样可以提高光学敏感性。
2.不同微生物要选择不同的固定方法,以保持抗原性最佳为原则,这样可以提高免疫学的敏感性。
3.荧光抗体的工作稀释度要高于染色效价2倍以上,以保证荧光抗体的充分结合和占位,并可缩短染色时间。
4.到目前为止,几乎所有的病原微生物都已经过免疫荧光染色试验,效果不完全一样,尤其对现场标本,关键是要针对不同标本,选出最佳处理和染色条件。
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