一、用途：
添加萘啶酮酸，吖啶黄素即为LB1，LB2，用于李斯特氏菌二步增菌(GB4789.28-2013，GB 4789.30-2016)。
二、实验原理：
胰胨、多价胨和酵母膏提供氮源、维生素和生长因子；李斯特氏菌可耐受较高含量的氯化钠；磷酸二氢钾和磷酸氢二钠为缓冲剂；七叶苷为可发酵的糖类；萘啶酮酸和吖啶黄为选择性抑菌剂，抑制非李斯特氏菌的生长。
三、培养基配方（g/L）：
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胰胨 |
5.0 |
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多价胨 |
5.0 |
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酵母膏 |
5.0 |
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氯化钠 |
20.0 |
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磷酸氢二钾 |
12.0 |
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磷酸二氢钾 |
1.4 |
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七叶苷 |
1.0 |
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pH 7.3±0.1 25℃ |
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此配方可以进行改良或增加营养成分以获得最佳的结果
四、试验方法：
1、称取本品49.4g， 加热搅拌溶解于 1000ml蒸馏水中，分装， 121℃高压灭菌15分钟，备用。
LB1液：每225ml培养基中加入1支萘啶酮酸（5.0mg/支）和1支吖啶黄素（3.0mg/支）；
LB2液：每200ml培养基中加入1支萘啶酮酸（4.0mg/支）和1支吖啶黄素（5.0mg/支）。
2、制备质控菌液。
3、混合菌的接种
在装有待测培养基的试管中接种10-100CFU的目标菌，并接种1000-5000CFU的非目标菌，接种总量1ml，同时接种两个平行管，混匀。同时分别将目标菌菌悬液（与试管接种同一稀释度）和非目标菌菌悬液（比试管接种小10-100倍稀释度）1ml倾注平板，接种两个平板，作接种量计数用，30±1℃培养18-24小时。
4、非目标菌接种
在装有待测培养基的试管中接种1000-5000CFU的非目标菌，接种量1ml，同时接种两个平行管，混匀，30±1℃培养18-24小时。
5、培养液的接种
5.1混合菌培养液的接种
用10μL接种环取1环经培养后的混合菌培养液，换线接种到PALCAM上，每管接种一个平板，36±1℃培养24-48小时。
5.2非目标菌培养液的接种
吸取10μL经培养后的非目标菌培养液，均匀涂布接种到TSA上，每管接种一个平板。也可使用倾注法进行接种，36±1℃培养18-24小时。
6、记录实验结果
目标菌在选择性平板上的菌落应>10CFU，则表示待测液提培养基的生长率良好；非目标菌在非选择性平板上的菌落<100CFU，则表示待测液体培养基的选择性为良好。
五、结果观察与解释：
接种以下质控菌株，在30±1℃培养18-24小时：
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质控菌株 |
菌株编号 |
接种量 （CFU） |
方法 |
质控结果 |
其他特征 |
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单增李斯特氏菌 大肠埃希氏菌 粪肠球菌 |
ATCC19115 ATCC25922 ATCC29212 |
10-100 1000-5000 1000-5000 |
半定量 |
在PALCAM上＞10CFU |
灰色至黑色菌落，带有黑色晕环 |
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大肠埃希氏菌 |
ATCC25922 |
1000-5000 |
在TSA上＜100CFU |
/ |
|
|
粪肠球菌 |
ATCC29212 |
1000-5000 |
在TSA上＜100CFU |
/ |
图1-2 李氏菌增菌肉汤（LB2）微生物质控结果
备注：a：单增李斯特氏菌，b：大肠埃希氏菌，c：粪肠球菌，d：空白对照
六、注意事项：
本培养基仅为细菌鉴定的一部分，需做其他补充试验。
相关产品：
相关标准：
GB 4789.30-2016 单核细胞增生李斯特氏菌检验 点击下载
GB 4789.28-2013 培养基和试剂的质量要求 点击下载
注:本文属海博生物原创,未经允许不得转载。
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