初级产品阶段的微生物样品采集

  初级产品阶段的采样用于监测动物中可能携带的人畜共患病原体的传播途径,样本应从动物及其环境中获取,包括在运输过程中和在屠宰场中,此时采样计划(包括方法、数量、重量和体积等),应根据初级产品的性质和需要采样的对象而变化。

① 农场环境下的采样

  对消毒后的动物房进行采样时,最好在所有表面干燥后再进行,以最大限度地减少消毒剂对采集样品过程中的干扰。若已知使用的消毒剂,应将适当的中和剂添加到相关的稀释剂中。样品应在采样当天进行培养。

  环境表面采样可使用适宜的织物拭子,棉签等,为了最大限度获得微生物,拭子棉签等应尽可能大,擦拭足够大的面积,以确保所有表面材料都被覆盖到。

  对各种类型的地面,可穿着靴袜走动采样。采样前用饮用水或其他合适的稀释剂润湿靴袜。对大空间的代表性区域进行采样时,例如在家禽舍中,每间禽舍至少需要100步,包括房屋的全长和宽度﹐以及任何零散或条块的地区,并确保包括粪便积聚区域或潮湿的垃圾区域。拖拭子可以与靴袜在相同的情况、相同的采样原则下使用。

  垃圾样品通常不具有代表性,最好收集一个大样本,如从整个房屋内至少60个不同的地方收集总量约2kg重的样品。粪便样品通常可以收集5个～20个单独的粪便﹐也可采集传送带﹑禽舍的地板、饲料坡道等处的混合粪便,应确保各处所采集的样品能代表性反应动物群体的状态。尘样可使用手套或合适的无菌硬刷,刮刀收集,也可使用潮湿的织物拭子从表面收集薄层的灰尘,避免在靠近饲料输送系统的地方取样,因为饲料粉尘颗粒在此处的灰尘中积累过多,不要从最近使用过的加热器或灯具上收集灰尘,因为热量和光线会降低样品中细菌的含量。

  采集的水样应包括水中的沉淀物,还应包括采集自饮水系统的拭子。可从钟形槽或槽式饮水系统中舀取沉淀物﹐并使用干的织物拭子在槽与水容器之间的界面周围擦拭采样。采集牧场动物饮用的天然水源时,样本最好是河流中缓慢移动的水或溪流弯曲处的沉积物和积聚在泉水深层带中的沉积物。对主要供水管道进行采样时,最好收集较大量的水(如5L～10L) ,或将管道过滤器留置在供水系统中并定期取出进行检测,或在生物体较易附着的水箱中悬放无菌海绵或棉塞,待1天～2天后取出进行培养。

  液体清除系统,如排水沟或水道采样可采用Moore's排水拭子,将其锚定在排水管或液体废物处理管道中5天～7天,然后取下进行培养。

  对奶牛场,牛的健康状况检查采样采用绳拭子,即将无菌绳索悬挂在饲料和水槽的正上方,牛只会用它擦拭及咀嚼,从而将细菌转移到绳索上24h后取下送检。通常位于挤奶设备和散装罐之间以除去牛奶中的异物的一次性过滤器,也可用于农场的微生物状况和卫生标准评估。

② 对动物的采样

  对农场动物采样通常需要对动物进行约束,当从动物的直肠﹐泄殖腔或鼻拭子采样时,应注意避免对动物造成伤害,同时最大限度地提高拭子上对样本采集的采集率。新鲜粪便应从地板或从动物的直肠内采取。皮肤,皮毛或羽毛的采样使用由织物片组成的湿润的大拭子连续擦拭动物的背部或其他受污染区域(每块拭子至多擦拭5只动物)来获得。

  对屠宰动物的采样包括直肠内容物、盲肠内容物或完整盲肠(对家禽﹐采集的样品最好是完整的盲肠;对猪和其他物种,可在盲肠的盲端捆扎并送到实验室,或对盲肠外部仔细消毒后现场采集内容物)、肠系膜淋巴结和扁桃体。

③ 孵化场的采样

  对(禽类)孵化场的采样主要检测目的是沙门氏菌。对孵化篮内衬采样尽可能选取面积大的衬垫,总计约1m²。将内衬小心收集到无菌袋中,并尽可能多地保留其黏附的物质。若有蛋壳被压碎并残留在内衬时,也应包含在采样中。尽可能从多的孵化篮内收集孵化后蛋的破壳,将其收集在一个大袋子内。孵化后残留的绒毛样品更具有检测参考价值,可使用手套或织物拭子采集孵化场地面上的绒毛,最好收集干燥的,特别是积累在孵化器的空气提取管中的样本。

  收集新孵出的幼雏的早期肠道排泄出的胎粪样本,直到获得来自至少250只幼雏的胎粪样品。最佳样本数应该不低于300,从而可以可靠地检测出大于等于1%的胎粪污染。

  对未能孵化的幼雏胚胎采样,可检测由母体垂直传播的沙门氏菌。由于蛋仍然完好无损,因此胚胎(蛋)可作为饲养鸡群中的沙门氏菌感染程度的指标。通常,至少需有60个鸡蛋送往实验室。从胚胎(蛋)中的内脏和卵黄囊进行无菌采样并收集。对被淘汰的幼雏,即由于性别或身体缺陷被认为是不适合饲养的活体幼雏采样,类似于死胎样品的抽样检测程序。通常送往实验室的幼雏至少60只。

  对送往养殖场的幼雏,采样应该尽量在幼雏送入禽舍前进行,采集放在装有幼雏盒子底部的垫纸作为样品。采样应小心谨慎,尽量减少来自禽舍或采样者手部带来的污染。每个样本群中至少包含5个幼雏盒的样品,样本的总面积至少为1m²,放于无菌塑料袋中送往实验室。

④ 动物运输车辆、模块和箱子的采样

  运输工具与任何表面一样,采样的面积越大,采集和检测的独立样品的数量越多,检测到目标微生物的可能性就越大。

  对大型动物运输车辆,大号的手持织物拭子或靴子在适当的环境情况下可用于对地板表面残留的粪便进行采样。采样点应该包括地板所有的主要相关部分。

  对家禽的运输条板箱及模块,在运输车辆的板条箱和地板上采集粪便残留物可用于评估屠宰批次的污染可能性。最好对多个板条箱的地面进行采样。应注意不同批次之间使用的采样设备应消毒,避免交叉污染。

  动物运输完成后,相关车辆和设备应该立刻进行清洗和消毒,可使用手持织物拭子尽可能全面地对车辆内与动物接触的部分,包括任何通风设备进行采样。为评估车辆仍然携带污染的可能,搁脚板﹑轮拱和表面材料均可进行采样。

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