使用化学消毒剂的目的是将环境中的微生物杀灭或降低其在环境中的污染程度。因此在长期使用化学消毒剂时，应制定清洁和灭菌的标准操作规程，并定期进行验证，以确证清洁与灭菌的有效性。由于消毒剂的杀菌结果会受到被消毒表面的类型与被消毒物的接触时间以及相关设施中的微生物种群影响，每个使用者都应对消毒剂在不同的使用条件下的消毒效果进行评价。
1. 验证前的考虑因素
a) 基于消毒剂本身的消毒能力进行设计及评价；
b) 基于生产和实验室环境生物真实负载进行设计及评价；
c)验证内容应包括消毒条件、方法、所用介质、消毒剂浓度、消毒时间、消毒剂的交替使用等;
d)选择合适的试验方案；
e)所有的规程、方法和结果均要形成文件，以提供一个完整的验证项目的永久性书面记录。
2.制定验证方案
验证方案应阐明验证的目的、验证的内容和原因；应详尽把整个验证的每一个部分落实到具体的部门和个人；应说明取样方法（包括取样数证和取祥点）以及测试方法；“合格标准”必须有限定范围，包括如结果超越限度时如何进行调查和纠正的方法。
3.空气消毒效果的微生物监测
(1)采样时间
在消毒处理后、操作前进行。
(2)采样方法
采样前．关好门窗．在尤人走动的情况下．静止10min进行采祥。室内面积≤30m2．对角线内、中、外设3点，内、外点布点部位距墙壁1m处；室内而积＞30m2，设4角及中央5点、4角的布点部位距墙壁1m处。
将营养琼脂平板(9cm)放在室内各采样点处．采祥窃度为距地而0. 8m~1.5m。采样时．将平板盖打开，暴露5min．盖好平板．将平板赏于36°C士1°C恒温箱培养48h，计数菌落数．并分离致病菌。
(3)检测方法: 平板暴露法
(4)结果计算见式(5-1):
式中：
A——平板面积，cm2；
T——平板暴露时间，min；
N——平均菌落数，CFU/平皿；
(5)结果判定
参见 GB15982一2012《医院消毒卫生标准》和 WS/T367—2012《医疗机构消毒技术规范》Ⅰ类区域：细菌总数10CFU/m3，并且未检出致病菌为消毒合格；Ⅱ类区域：细菌总数 200CFU/m3，并且未检出致病菌为消毒合格；Ⅲ类区域：细菌总数500CFU/m3，并且未检出致病菌为消毒合格。
4.手和皮肤黏膜消毒效果监测
(1)采样时间
在消毒后立即采样。
(2)采样方法
①手的采祥：被检人五指并拢．用没有含相应中合剂的无菌洗脱液的棉拭子在双手指屈面从指根到指端往返涂擦2次（一只手涂擦面积约30cm2，并随之转动采样棉拭子，剪去操作者手接触部位，将棉拭子投入10mL含相应中合剂的无菌洗脱液试管内，立即送检。
②皮肤黏膜采样：用5cmX5cm的标准灭菌规格板，放在被检皮肤处．用浸有含相应中 合剂的无菌洗脱液的棉拭子1支，在规格板内横竖往返涂擦各5次，并随之转动棉拭子，剪 去操作者手接触部位，将棉拭子投入10mL含相应中合剂的无菌洗脱液试管内，立即送检。 不规则的黏膜皮肤处可用棉拭子直接涂擦采样。若表面不足5cmX5cm，可用相应面积的规格板采样。
(3)检测方法
①细菌菌落总数检测：将采样管在混匀摇上振荡20s或用力振打80次，用无菌吸管吸取1.0mL待检样品接种于灭菌平皿．每一样本接种2个平皿，加入已熔化的45℃~48℃的营养琼脂15mL~18mL．混匀后，于36℃±1℃培养48h，计数菌落数。结果计算方法见式(5-2)。
②致病菌检测：金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和溶血性链球菌按相关标准执行。
(4)结果判定
菌落总数≤CFU/m2并未检出致病菌为消毒合格。
5.物品和环境表面消毒效果的监测
(1)采祥时间
在消毒后4h内进行采样。
(2)采样面积
被采表面<100cm2，取全部表面；被采表面≤100cm2，取100cm2。
(3)采样方法
用10cmX10cm的标准灭菌规格板．放在被检物体表面，用没有含相应中合剂的无菌洗脱液的棉拭子1支，在规格板内横竖往返涂擦各5次．并随之转动棉拭子，剪去操作者手接触部位，将棉拭子投入10mL含相应中合剂的无菌洗脱液试管内，立即送检。 不规则的物体表面可用棉拭子直接涂擦采样。
(4)检测方法
①细菌菌落总数检测：按“手和皮肤黏膜消毒效果监测”执行；
②致病菌检测：金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和溶血性链球菌按相关标准执行。
(5)结果判定
菌落总数≤5CFU/m2，并未检出致病菌为消毒合格。
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