可可中含的花青素可能为生物抑制因子,而牛奶能中和可可及其制品的杀菌作用,因此宜将UHT奶或灭菌的含10%脱脂奶粉的复原奶液用作检测重要致病菌(沙门氏菌和产志贺样毒素的大肠埃希氏菌STEC)的预增菌肉汤。在其他项目的检测中,缓冲蛋白胨水常被用作通用的稀释剂。对于可可粉及其他可能由于热加工不充分而可能被革兰氏阳性菌高度污染的样品,在250mL的初始悬浮液中添加0.45ml1%(质量浓度)煌绿溶液﹐可有效减少此类细菌在非选择性增菌期间对低水平的革兰氏阴性目标菌的生长竞争。而是否需应用这种处理方式取决于样品的类型和实验室的经验。
制备时,应先将稀释剂预热至37℃~40℃。称取试料(如25g)装入无菌塑料袋中,加入加热的稀释剂(如225mL)以达到1:10初始悬浮液,并立即手动摇匀。将悬浮液在实验室环境温度(18℃～27℃)下放置2min~30min溶化,然后在蠕动式均质器中充分混合60s±5s。当检测大块的巧克力或其他不易粉碎的可可物质时,可能需要先在42℃～47℃之间将巧克力适当的融化,但不要超过必要的时间。对于含>20%脂肪的巧克力产品,除非产品内已经含有足够的乳化剂,否则需在稀释液中加入吐温80或其他乳化剂。
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