中文版  |   English  |   加入收藏  |   客服热线:400-0532-596
微生物技术资料
文章检索
  首页 > 微生物知识->海博原创文章——知识拓展->两种β-半乳糖苷酶的测定方法

两种β-半乳糖苷酶的测定方法

王天宇
录入时间:2023-2-16 10:48:50 来源:青岛海博生物

  β-半乳糖苷酶是细菌利用乳糖的关键酶。细菌分解乳糖主要依靠两种酶的作用,一种是β-半乳糖苷酶渗透酶,这种酶作用于细胞膜上,可以让乳糖进入细胞,而另一种就是β-半乳糖苷酶,这种酶位于细胞内,使乳糖分解成半乳糖和葡萄糖。

  同时具有上述两种酶的细胞,可以在24-48h内发酵乳糖,同时缺乏上述两种酶的细菌,不能分解乳糖。而部分细菌只具有β-半乳糖苷酶(如宋内志贺氏菌、亚利桑那沙门氏菌),而不具有β-半乳糖苷酶渗透酶,因此乳糖进入细胞很慢,宏观表现则为迟缓发酵乳糖(通常需要3-7天)。在《GB4789.5-2012食品安全国家标准 食品微生物学检验 志贺氏菌检验》中,提供了两种检测细菌是否含有β-半乳糖苷酶的方法。


1. 液体法(ONPG法)

  所有乳糖快速发酵和迟缓发酵的细菌,都可以快速水解邻硝基酚-β-D-半乳糖苷(O-nitrophenyl-β-D-galactopyranoside,ONPG)而生成黄色的邻硝基酚。因而利用ONPG可以快速检测迟缓发酵乳糖的菌株。

  培养基成分:

ONPG

60.0mg

0.01mol/L磷酸钠缓冲液(PH7.3-7.7)

10.0ml

1%蛋白胨水(PH7.3-7.7)

30.0ml

  制法:

  将ONPG溶于缓冲液内,加入蛋白胨水,以过滤法除菌,分装于10mm×75mm试管内,每管0.5mL,用橡皮塞塞紧。

  也可直接购买我司安瓿瓶装的ONPG生化管 点击查看

  试验方法:

  挑取培养物一满环接种,于36℃±1℃培养1h-3h和24h观察结果。如果β-半乳糖苷酶产生,则于1h-3h变黄色,如无此酶则24h不变色。ONPG在固体培养基中分解后的显色终产物会大面积扩散,因此只适用于液体培养基。

液体法(ONPG法)


2. 平板法(X-Gal法)

  利用5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷(X-Gal)作为显色底物,如果细菌含有β-半乳糖苷酶,则分解显色底物,平板上的培养物变蓝色。如不含此酶,则菌落呈无色或不透明色。

  培养基成分:

蛋白胨

20.0g

氯化钠

3.0g

5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷(X-Gal)

200.0mg

琼脂

15.0g

蒸馏水

1000.0ml

  制法:

  将各成分加热煮沸于1L蒸馏水中,冷却至25℃左右校正pH至7.2±0.2,115℃高压灭菌10min,倾注平板避光冷藏备用。

  试验方法:

  挑取培养物接种于平板,划线或点种皆可,于36℃±1℃培养18-24h观察结果。如果有β-半乳糖苷酶产生,则平板上菌落呈蓝色。如不含此酶,则菌落呈无色或不透明色。培养48h-72h后,有部分转为淡粉色。

  X-Gal在液体和固体里中检测β-半乳糖苷酶的活性比其他显色或荧光底物更有效。

在X-Gal上产生β-半乳糖苷酶的菌落状态


相关产品:

ONPG-点击查看产品详情


相关标准:

GB 4789.5-2012 志贺氏菌检验 -标准下载


注:本文属海博生物原创,未经允许不得转载。

 

上一篇:含酶TSA平板效果验证试验

下一篇:艰难梭菌的活化与保存

相关文章:
两种产气荚膜梭菌分离培养基的对比 鼻拭子与咽拭子两种取样方法在新型冠状病毒核酸筛检中的比较研究
诊断幽门杆菌两种方法学的比较 痰液中结核杆菌两种试验方法的比较
新生隐球菌两种培养方法的比较 野菊花两种提取方式对5种常见细菌的抑菌效果的比较
两种氟喹诺酮类药物对肺炎克雷伯菌防耐药突变浓度及耐药突变体耐药性的研究 两种酵母菌药敏试验的介绍及比较
两种检测淋病奈瑟菌方法的比较 两种培养基对嗜血杆菌属分离鉴定的比较
首页 | 关于我们 | 网上商城 | 在线客服 | 联系我们
业务联系电话
   400-0532-596 0532-66087773
   0532-66087762 0532-81935169
邮箱:qdhbywg@vip.126.com
地址:青岛市城阳区锦汇路1号A2栋
产品技术咨询
  工作日(周一至周六8:00-18:00):
  18562658263 13176865511
  其它时段:13105190021
投诉与建议:13105190021 13006536294