肺炎克雷伯菌检验标准操作程序

1 方法来源

  ChinaPIN-2022-TZFX019《国家致病菌识别网技术手册肺炎克雷伯菌》

2 适用范围

  本程序规定了食品中肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumoniae）的检验方法。

3 培养基和试剂

  3.1 磷酸盐缓冲液（PBS）点击查看

  3.2 麦康凯培养基 点击查看

  3.3 血平板 点击查看

第一法 定性检验

4 检验程序

  肺炎克雷伯菌检验程序见图1。

图1 肺炎克雷伯菌检验程序

5 操作步骤

  5.1 增菌

  以无菌操作取样品25g（mL）加入到含有225mL PBS缓冲液 的均质袋中，在拍击式均质器上连续均质1min～2min；或放入盛有225mL PBS缓冲液的均质杯中，8000r/min～10000r/min均质1min～2min。于36℃±1℃培养8h~18h。

  5.2 分离

  取PBS增菌液划线接种于麦康凯平板上，于36℃±1℃培养24h～48h，观察各个平板上生长的菌落。肺炎克雷伯菌在麦康凯培养基上形成淡粉色菌落，大而隆起，光滑湿润，呈粘液状（图2），48小时候相邻菌落易融和成脓汁样（图3）。

图2 肺炎克雷伯菌在麦康凯培养基上培养24小时	图3 肺炎克雷伯菌在麦康凯培养基上培养48小时

  自麦康凯平板上分别挑取3个～5个典型或可疑菌落，分别接种在血平板上纯化，于36℃±1℃培养24h～48h。肺炎克雷伯菌在血平板形成白色或略透明大菌落（图4），48h后易融合成片，形成胶水样菌苔（图5），不溶血，无特殊气味产生。

图4 肺炎克雷伯菌在血平板上培养24小时	图5 肺炎克雷伯菌在血平板上培养48小时

  肺炎克雷伯菌经革兰氏染色后在镜下呈现较短粗的革兰氏阴性杆菌，单独、成双或短链状排列，大小约为0.3μm～1.5μm×0.6μm～6μm。无芽胞，无鞭毛（图6）。

图6 肺炎克雷伯菌的镜下形态特征（革兰染色×1000）

  5.5 鉴定

  5.5.1 生化鉴定：常见的微生物生化鉴定系统，如VITEK 2（用GN卡）、BD-Phoenix100生化仪、生物梅里埃公司生产的API生化鉴定试剂条等均可鉴定肺炎克雷伯菌。

  5.5.2 微生物质谱鉴定：目前常见的微生物质谱仪均能很好地鉴定肺炎克雷伯菌。

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