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嗜热菌标准操作程序



录入时间:2023-2-23 10:48:20 来源:2023年国家食品污染物和有害因素风险监测工作手册(下卷)

1 检验程序

  婴幼儿配方奶粉中嗜热菌的检验程序见图1。

图1嗜热菌的检验程序

图1 嗜热菌的检验程序


2 操作步骤

  2.1 样品的稀释

  2.1.1 称取25g样品置于盛有225mL无菌磷酸盐缓冲液或无菌生理盐水的无菌均质杯内,8000r/min~10000r/min均质1min~2min,或放入盛有225mL稀释液的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打1min~2min,制成1:10的样品匀液。

  2.1.2 用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL,沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面),振摇试管或换用1支无菌吸管或吸头反复吹打使其混合均匀,制成1:100的样品匀液。

  2.1.3 按2.1.2操作,制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次,换用1次1mL无菌吸管或吸头。

  2.1.4 根据对样品污染状况的估计,选择2个~3个适宜稀释度的样品匀液,在进行10倍递增稀释时,吸取1mL样品匀液于无菌培养皿内,每个稀释度做两个培养皿。同时,分别吸取1mL空白稀释液加入两个无菌培养皿内作空白对照。

  2.1.5及时将15mL~20mL冷却至46℃~50℃的MPC培养基(可放置于48℃±2℃恒温装置中保温)倾注培养皿,并转动培养皿使其混合均匀。

  2.2 培养

  水平放置待琼脂凝固后,将平板翻转,55℃±1℃培养48h ± 2h,培养过程中注意防止平板干裂。

  2.3 菌落计数

  2.3.1 可用肉眼观察,必要时用放大镜或菌落计数器,记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位(colony forming unit,CFU)表示。

  2.3.2 选取菌落数在30CFU~300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计嗜热菌数。低于30CFU的平板记录具体菌落数,大于300CFU的可记录为多不可计。


3 嗜热菌的计算方法

  3.1 若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内,计算两个平板菌落数的平均值,再将平均值乘以相应稀释倍数,作为每g样品中嗜热菌结果。

  3.2 若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时,按式(1)计算:

  式中:

  N ——样品中嗜落菌菌落数;

  ΣC——平板(含适宜范围菌落数的平板)菌落数之和;

  n1——第一稀释度(低稀释倍数)平板个数;

  n2——第二稀释度(高稀释倍数)平板个数;

  d ——稀释因子(第一稀释度)。

  3.3 若所有稀释度的平板上菌落数均大于300CFU,则对稀释度最高的平板进行计数,其他平板可记录为多不可计,结果按平均嗜落菌菌落数乘以最高稀释倍数计算。

  3.4 若所有稀释度的平板菌落数均小于30CFU,则应按稀释度最低的平均嗜落菌菌落数乘以稀释倍数计算。

  3.5 若所有稀释度平板均无菌落生长,则以小于1乘以最低稀释倍数计算。

  3.6 若所有稀释度的平板菌落数均不在30CFU~300CFU之间,其中一部分小于30CFU或大于300CFU时,则以最接近30CFU或300CFU的平均菌落数乘以稀释倍数计算。


4 结果报告

  4.1 菌落数小于100CFU时,按“四舍五入”原则修约,以整数报告。

  4.2 菌落数大于或等于100CFU时,第3位数字采用“四舍五入”原则修约后,采用两位有效数字,后面用0代替位数;也可用10的指数形式来表示,按“四舍五入”原则修约后,采用两位有效数字。

  4.3 若空白对照上有菌落生长,则此次检验结果无效。

  4.4 以CFU/g为单位报告。


附录A培养基和试剂

  A.1 含0.1%脱脂奶粉的平板计数琼脂(MPC)培养基 点击查看

  A.1.1 成分

胰蛋白胨
5.0g
酵母浸膏
2.5g
葡萄糖
1.0g
脱脂奶粉
1.0g
琼脂
10.0g~15.0g
蒸馏水
1000mL

  A.1.2 制法

  将上述成分加于蒸馏水中,煮沸溶解,调节pH至7.0±0.2。分装试管或锥形瓶,121℃高压灭菌15min。

  注1:脱脂奶粉不应含有抗生素类物质。

  注2:琼脂用量根据其凝固程度决定。


  A.2 无菌磷酸盐缓冲液 点击查看

  A.2.1 成分

磷酸二氢钾(KH2PO4)
34.0g
蒸馏水
500mL
  A.2.2 制法

  贮存液:称取34.0 g的磷酸二氢钾溶于500mL蒸馏水中,用大约175mL的1mol/L氢氧化钠溶液调节pH至7.2,用蒸馏水稀释至1000 mL后贮存于冰箱。

  稀释液:取贮存液1.25mL,用蒸馏水稀释至1000mL,分装于适宜容器中,121℃高压灭菌15min。


  A.3 无菌生理盐水 点击查看

  A.3.1 成分

氯化钠
8.5g
蒸馏水
1000mL
  A.3.2 制法

  称取8.5g氯化钠溶于1000mL蒸馏水中,121℃高压灭菌15min。


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