配制培养基时的注意事项以及常见问题分析

一、配制培养基时的注意事项

  1.培养基在灭菌前，需进行加热溶解（含琼脂的培养基需煮沸4-6次至琼脂完全溶解），再进行分装灭菌（应不超过1000mL）；

  2.含琼脂培养基，若灭菌前未进行加热溶解，灭菌后需充分摇匀使用；

  3.所有培养基不宜灭菌过度和长时间保温，特别是含糖量高的培养基，如沙氏葡萄糖琼脂，灭菌过度或保温时间过长易使葡萄糖发生焦化，灭菌后的培养基颜色会变深，pH会下降，此外还会使蛋白胨中的维生素分解，降低培养基的营养；

  4.需另加添加剂的培养基通常在培养基冷却至50℃左右时加入，已加入添加剂的琼脂类培养基不可熔化再次使用；

  5.配制好的培养基需及时灭菌，不可久置；

  6.培养基不可重复灭菌；

  7.琼脂培养基不可反复熔化使用；待用的琼脂培养基可置47-50℃水浴保温或50-60℃烘箱保温，一般不可超过4小时。

  8.使用蒸馏水或纯化水配制。饮用水或自来水中由于含矿物盐离子，配制培养基会产生浑浊现象。

  9.容器不易过满，容量至少应比培养基体积大20%。

二、配制过程中的常见问题分析

  1、培养基颜色不正确

  （1）含有酸碱指示剂的培养基，若颜色不正确，通常是由于pH不正确导致的，加热过度、错误的灭菌方式等都会导致此项问题。

  （2）加热过度导致某些成分分解或糖焦化，如SC培养基加热过度会变红，含糖量高的培养基，加热过度通常会出现颜色加深，呈焦糖色或棕褐色。

  （3）某些成分变质，如血液久置易变黑，制成的平板颜色偏棕黑色。

  2、培养基不凝固或凝固性差

  （1）称量错误

  （2）琼脂分布不均匀

  （3）培养基pH不正确

  （4）加热过度

  （5）琼脂量不足

灭菌前未加热溶解，灭菌后未充分摇匀，

会出现分层现象，琼脂凝固在底层，上层不凝固

  3、培养基产生沉淀

  （1）某些培养基原本就含有不溶性沉淀，如TTB，MC培养基等，配方中含有大量不溶性碳酸钙。

  （2）灭菌前未充分溶解，如Fraser培养基中含有大量磷酸盐，若灭菌前溶解不充足，灭菌后就会出现大量沉淀。

  （3）pH不正确，偏酸或偏碱都有可能使培养基中的部分金属离子产生沉淀。

  （4）水的纯度不够，天然水中含有较多的矿物盐离子，若未除净，则易与培养基中的磷酸盐反应生成沉淀。

  （5）添加剂加入温度不正确，卵黄、血液等对温度敏感的添加成分，若加入时温度过高或温差过大，易出现凝块。

  （6）称量错误。

  （7）试剂加入顺序不正确。

  4、培养基污染

  （1）灭菌方式不正确，导致灭菌不彻底

  （2）灭菌锅的灭菌效力不达标

  （3）灭菌量过多，灭菌前未加热溶解

  （4）培养基本身含耐热菌较多

  （5）灭菌过程中，灭菌锅内冷空气未排干净

  （6）灭菌锅放置过满

  （7）操作过程发生污染

  （8）分装培养基器皿灭菌不充分

  （9）滤膜破损

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