非选择性分离/计数固体培养基的出厂检验及验收方法

一、非选择性分离/计数固体培养基的介绍

  非选择性分离/计数固体培养基常用于细菌的计数、活化、分离纯培养等用途，含琼脂一般为1.2%-1.5%，可使用倾注法计数或制成平板涂布法计数使用，也可制成斜面用于菌种的传代保存，常见的有平板计数琼脂（PCA）、营养琼脂（NA）、胰蛋白胨大豆琼脂（TSA）等，培养基的组成为基础营养成分，无抑制性，一般不具有针对性，适用于大多数细菌的培养。

二、培养基的出厂检验-生长率测定

  1.菌液制备

  将质控菌株接种至非选择性肉汤或平板中进行活化培养（通常可使用TSB或TSA），使用生理盐水或磷酸盐缓冲液进行十倍系列稀释至适宜梯度。

  2.培养基准备

  将待测培养基及参比培养基按标签制备进行灭菌，制成平板备用（若采用倾注法接种，可将灭菌后的培养基置47-50℃水浴保温备用）。细菌通常用TSA做参比培养基，真菌通常使用SDA，有特殊营养要求的菌可选用适宜的无抑制性培养基做为参比培养基。

  3.接种及培养

  吸取0.1mL制备好的菌悬液，分别涂布至待测培养基和参比培养基，每平板接种水平为20-200CFU，至少接种2块平板，将接种好的培养基置于标准规定的条件下进行培养。

  4.结果计算及判定

  生长率PR=NS（待测平板菌落总数）/NO（参比培养基平板菌落总数，应≥100CFU），目标菌在待测培养基上应有典型的生长，生长率应不小于0.7。

三、培养基的验收方法

  将质控菌株接种至非选择性肉汤培养基中过夜培养制成工作菌悬液，使用1μL接种环挑取1环菌液，按照标准的方法连续划16线，置于标准规定的温度培养，如果仅一半的线有稠密菌落生长，则G为0.5。如果划线上没有菌落生长、生长量少于划线的一半或菌落生长微弱，则G为0，计算G值总和，应达到G≥6。

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