一、用途及试验原理:
用于军团菌硝酸盐还原试验。
硝酸盐培养基中的硝酸盐可被某些细菌还原为亚硝酸盐,加入对氨基苯磺酸和α-萘胺试剂,可与亚硝酸盐反应,产生一种红色重氮化合物而呈阳性;硝酸盐还原的最终产物也因细菌种类不同二不同,包括亚硝酸盐、氨、分子氮和一氧化碳等。若加入对氨基苯磺酸和α-萘胺试剂后不变色,再加入少许锌粉,如果变红,说明培养基中的硝酸盐未被细菌还原而仍然存在,被锌粉还原为亚硝酸盐后与对氨基苯磺酸和α-萘胺试剂反应显红色,则判定为硝酸盐还原阴性;如果加入锌粉后仍然不变红,说明培养基中的硝酸盐已被还原成亚硝酸盐,进而分解成氨、氮等产物,判定为硝酸盐还原阳性。
二、试验方法:
1.用磨砂轮在安瓿瓶颈部划线一圈,掰开待用;
2. 将标准储备菌株接种到非选择性肉汤中或采用其他制备方法,制备成5 McFarland浊度(约109CFU/ml)的菌悬液;
3. 吸取0.05ml-0.08ml(约1-2滴)菌悬液至生化管中,36±1℃培养24-120h后,观察试验结果。
三、结果观察与解释
接种以下质控菌株,放置36±1℃培养24-120h:
质控菌株 |
菌株编号 |
生长情况 |
其他特征 |
博兹曼军团菌 |
ATCC33217 |
+++ |
阴性 |
大肠埃希氏菌 |
ATCC25922 |
+++ |
阳性 |
硝酸盐肉汤(还原)质控结果
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