金黄色葡萄球菌的活化、保存及确认方法

一、金黄色葡萄球菌简介

  金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是隶属于葡萄球菌属的一种常见的条件致病性菌株，革兰氏染色为阳性球菌，呈葡萄状堆积，直径约0.5μm，具有较强的耐盐性，可在含10%氯化钠的培养基中生长，是无芽孢菌中抗逆性最强的菌种之一，主要可引起伤口感染或在肠道中产毒导致腹泻等症状。

二、活化方法

  培养基的选择：金黄色葡萄球菌的生命力强，易存活，对营养要求不高，常用的非选择性培养基大多数都可以用来对金黄色葡萄球菌活化及传代，如营养肉汤/琼脂、胰蛋白胨大豆肉汤/琼脂、脑心浸液肉汤/琼脂等。

  注：对菌种进行活化和传代时，通常不使用甘露醇氯化钠琼脂、Baird-parker琼脂、7.5%氯化钠肉汤等选择性培养基。

  操作方法：若菌种为冻干粉形式，按照说明书溶解后，可直接涂布或划线至NA/TSA/BHI平板上，也可加入至NB/TSB/BHI等液体培养基中；若菌种为甘油冻存管形式，从冰箱中取出速融后，NA/TSA/BHI平板上，也可加入至NB/TSB/BHI等液体培养基中；若菌种为瓷珠形式，挑取瓷珠可转入NA/TSA/BHI平板上，也可加入至NB/TSB/BHI等液体培养基中，30-37℃培养18-24h。

三、实验室常用保存方法

  1.斜面保存法

  将NA/TSA/BHI等培养基制成斜面管，接种金黄色葡萄球菌后培养至菌落生长良好，置于2-8℃可保存至少1个月，超过1个月容易出现菌种老化、污染、变异等现象，建议及时传代。

  2.脱脂牛奶/甘油/瓷珠冷冻保存法

  可挑取非选择性培养基上培养好的金黄色葡萄球菌至脱脂牛奶/液体/瓷珠菌种保存管中制成约10⁹CFU/mL的菌液（瓷珠保存法需摇匀后弃菌液保留瓷珠），置于冰箱或液氮罐中冷冻保存，在-70℃以下可保存两年以上，在-20℃也能保存一年以上，金黄色葡萄球菌生命力强，很容易保存数年或数十年。

四、菌种的确认

  1.菌落特征：大多数金黄色葡萄球菌在TSA上菌落呈现圆形光滑菌落，并有黄色色素，也有少数金黄色葡萄球菌不产黄色色素。在甘露醇氯化钠平板上由于分解甘露醇产酸，菌落呈黄色；在Baird-parker琼脂上呈现黑色圆形菌落，通常菌落周围会有浑浊带及透明圈，也有少数金黄色葡萄球菌不分解脂肪，菌落周围没有圈。

甘露醇氯化钠平板	Baird-parker平板

  3.溶血：大多数金黄色葡萄球菌可以产生两种以上的溶血素，在血平板上产生透明的β溶血环，也有少数金黄色葡萄球菌产溶血素少，在血平板上表现为弱溶血或不溶血。

  4.血浆凝固酶试验：金黄色葡萄球菌可产生血浆凝固酶，凝固兔血浆，此反应常用来做金黄色葡萄球菌的确证试验。

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