白色念珠菌的活化、保存及确认方法

一、白色念珠菌简介

  白色念珠菌（Candida albicans）又叫白色假丝酵母，是一种双相真菌，在培养基上生长通常呈现酵母相，菌落呈白色圆形凸起，具有酵母的香味，显微镜下观察时菌体呈卵圆形，与一般的酵母菌无异，感染人体致病时一般呈现为菌丝相，菌体有细长菌丝芽管产生，可供菌体吸收营养和附着在人体组织表面。

二、活化方法

  培养基的选择：白色念珠菌营养要求不高，通常使用沙氏葡萄糖琼脂/液体培养基或马铃薯葡萄糖琼脂培养基进行活化，在营养琼脂、TSA等细菌培养基上虽然也能生长，但较为缓慢，一般不常用。白色念珠菌在25-37℃培养均可生长，一般培养2-3天即可。

  操作方法：若菌种为冻干粉形式，按照说明书溶解后，可直接涂布或划线至SDA/PDA平板上，也可加入至SDB/PDB等液体培养基中；若菌种为甘油冻存管形式，从冰箱中取出速融后，涂布或划线至SDA/PDA平板上，也可加入至SDB/PDB等液体培养基中；若菌种为瓷珠形式，挑取瓷珠可转入SDA/PDA平板上，也可加入至SDB/PDB等液体培养基中，20-25℃培养2-3天。

三、实验室常用保存方法

  1.斜面保存法

  将SDA或PDA培养基制成斜面管，接种白色念珠菌后培养至菌落生长良好，置于2-8℃可保存1-3个月，超过3个月容易出现菌种老化、污染、变异等现象，建议及时传代。

  2.脱脂牛奶/甘油/瓷珠冷冻保存法

  可挑取非选择性培养基上培养好的白色念珠菌至脱脂牛奶/液体/瓷珠菌种保存管中制成约10⁸-10⁹CFU/mL的菌液（瓷珠保存法需摇匀后弃菌液保留瓷珠），置于冰箱或液氮罐中冷冻保存，在-70℃以下可保存两年以上，在-20℃也能很容易保存一年以上，白色念珠菌生命力强，很容易保存数年或数十年。

四、菌种的确认

  1.菌落特征：白色念珠菌在平板上菌落呈现白色圆形凸起状，具有酵母香味，在念珠菌显色平板上呈绿色菌落。

SDA平板	念珠菌显色平板

  3.芽管试验：将白色念珠菌接种至吐温80-玉米粉琼脂上，20-25℃培养2-3天，挑取1环菌接种至兔血清，37℃培养2-3小时，镜检观察，菌体可产生芽管。

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