双歧杆菌的活化及保存

一、双歧杆菌简介

 双歧杆菌属（Bifidobacterium）是严格厌氧的革兰氏阳性杆菌，一端通常呈现分叉状，是人和动物肠道中益生菌之一，可以分解多种碳水化合物产生乳酸，也属于乳酸菌。

双歧杆菌生长需要严格的厌氧环境，氧气会对双歧杆菌产生毒害作用，导致双歧杆菌死亡，但在二氧化碳存在的条件下，对于低浓度的氧气具有一定的耐受性，通常使用BBL培养基/TPY培养基/MRS培养基进行培养，培养基中常添加半胱氨酸做为还原剂帮助维持厌氧环境。

二、活化方法

培养基的选择：MRS肉汤/琼脂、TPY肉汤/琼脂、BBL肉汤/琼脂培养基均可。

培养环境：可使用厌氧培养箱、厌氧罐等设备。

操作方法：若菌种为冻干粉形式，按照说明书溶解后，可直接涂布或划线至MRS/TPY/BBL平板上，也可加入至液体培养基中；若菌种为甘油冻存管形式，从冰箱中取出速融后，涂布或划线至MRS/TPY/BBL平板上，也可加入至液体培养基中。

注：由于氧气对双歧杆菌具有毒害作用，因此进行双歧杆菌的操作时，应在厌氧操作箱中进行。若在正常空气中操作，应尽可能快的完成操作，从接种开始到平板放入厌氧环境中培养整个流程的时间，应尽可能控制在15min以内，长时间暴露在空气中易导致双歧杆菌死亡。

三、实验室常用保存方法

双歧杆菌的保存可使用甘油/脱脂牛奶菌种保存管低温冷冻保存。挑取非选择性培养基上培养好的双歧杆菌至脱脂牛奶/液体菌种保存管中制成约10⁸-10⁹CFU/mL的菌液，置于超低温冰箱或液氮罐中冷冻保存，在-70℃以下可保存两年以上。

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