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多聚物介导法



录入时间:2023-10-12 16:10:47 来源:青岛海博生物

聚乙二醇(PEG)和多聚赖氨酸等是协助DNA转移的常用多聚物,尤以PEG应用最广。这些多聚物与二价阳离子(如Mg2+、Ca2+、Mn2+等)及DNA混合后,可在原生质体表面形成颗粒沉淀,使DNA进入细胞内。

这种方法常用于酵母细胞以及其他真菌细胞,也可用于动物细胞。处于对数生长期的细胞或菌丝体用消化细胞壁的酶处理变成球形体后,在适当浓度的聚乙二醇6000(PEG6000)的介导下就可将外源DNA导入受体细胞中。

将外源基因导入哺乳动物细胞还可以采用磷酸钙或DEAE-葡聚糖介导的转染法。这是一种进行瞬时表达的常规方法。哺乳动物细胞能捕获黏附在细胞表面的DNA-磷酸钙沉淀物,并能将DNA转入细胞中,从而实现外源基因的导入。

在实验中,先将重组DNA同CaCl2混合制成CaCl2-DNA溶液,随后加入磷酸钙形成 DNA-磷酸钙沉淀,黏附在细胞表面,通过细胞的内吞作用进入受体细胞,达到转染目的。

DEAE(二乙胺乙基葡聚糖)是一种高分子多聚阳离子材料,能促进哺乳动物细胞捕获外源DAN分子。其作用机制可能是DEAE与DNA结合后抑制了核酸酶的活性,或DEAE与细胞结合后促进了DNA的内吞作用。

脂质体(liposome)是人工构建的由磷脂双分子层组成的物质,成膜状结构。在形成脂质体时,可把用来转染的目标DNA分子包在其中,然后将该种脂质体与细胞接触,就将外源DNA分子导入受体细胞。脂质体介导法的原理是:受体细胞的细胞膜表面带负电荷,脂质体颗粒带正电荷,利用不同电荷间引力,就可将DNA、mRNA及单链RNA等导入细胞内。

 

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