四唑嘧磺隆、氯吡嘧磺隆和嘧啶磺隆检测方法

1．分析目标化合物
农药成分物质                                        分析目标化合物
四唑嘧磺隆                                          四唑嘧磺隆
氯吡嘧磺隆                                          氯吡嘧磺隆
嘧啶磺隆                                            嘧啶磺隆
2．仪器设备
带紫外分光光度检测器的高效液相色谱仪及液相色谱-质谱仪。
3．试剂
使用附录2所列试剂。
4．标准品
四唑嘧磺隆：含四唑嘧磺隆99%以上，熔点为170℃～173℃。
氯吡嘧磺隆：含氯吡嘧磺隆99%以上，熔点为175℃～177℃。
嘧啶磺隆：含嘧啶磺隆99%以上，熔点为166℃～170℃。
5．试验溶液的制备
a 提取方法
谷类、种子类：样品粉碎,通过420μm标准网筛后，称取其10.0g，加入20mL水，放置2小时。
水果、蔬菜：准确称取约1kg样品，必要时定量加入适量水，搅碎混合均匀后，称取相当于20.0g样品的量。
加入100mL丙酮，搅拌3分钟，用涂布有1cm厚硅藻土的滤纸，抽滤于磨口减压浓缩器中。取出滤纸上的残留物，加入50mL丙酮，搅拌3分钟，与上述同样操作，合并滤液于减压浓缩器中，40℃以下浓缩至约30mL。
加入100mL 10％氯化钠溶液，用1mol/L盐酸调节pH3～4后，移入300mL分液漏斗中。用50mL乙酸乙酯洗涤上述减压浓缩器的茄型瓶，洗液合并到上述分液漏斗。用振荡器激烈振荡5分钟后，静置，乙酸乙酯层移入另一个300mL分液漏斗中。水层中加入50mL乙酸乙酯，与上述同样操作，合并乙酸乙酯层于上述300mL分液漏斗中，加入100mL正己烷及50mL 2％的磷酸氢二钾溶液，用振荡器激烈振荡5分钟后，静置，水层转移到200mL烧杯中。乙酸乙酯及正己烷层中加入50mL 2％的磷酸氢二钾溶液，与上述同样操作后，将水层合并在上述烧杯中。水层搅拌均匀，用6mol／L盐酸调整pH3～4后，转移到另一个300mL分液漏斗中。用50mL乙酸乙酯洗涤上述烧杯，合并洗液于分液漏斗中，加入10g氯化钠，用振荡器激烈振荡5分钟后，静置，乙酸乙酯层移入200mL三角瓶中。水层中加入50mL乙酸乙酯，与上述同样操作后，合并乙酸乙酯层于上述三角瓶中。加入适量无水硫酸钠，不时摇动、混合，放置15分钟后，滤入磨口减压浓缩器中。再用20mL乙酸乙酯洗涤三角瓶，以此洗涤液洗涤滤纸上的残留物，重复操作2次，合并2次洗涤液于减压浓缩器中，40℃以下除去乙酸乙酯。残留物中加入5mL乙腈溶解。
b 净化方法
① 氧化铝柱色谱法
在中性氧化铝小柱(1.710g) 中注入10mL乙腈，弃去流出液。将a 提取方法所得的溶液注入柱中后，注入10mL乙腈，弃去流出液。再注入25mL乙腈：水（4：1）混合溶液，收集流出液于磨口减压浓缩器中，40℃以下除去乙腈及水。残留物中加入5mL丙酮：正己烷（3：1）混合溶液溶解。
② 三甲胺基丙基甲硅烷基化硅胶柱色谱法
在三甲胺基丙基甲硅烷基化硅胶小柱(500mg)中注入10mL丙酮：正己烷（3：1）混合溶液，弃去流出液。将① 氧化铝柱色谱法得到的溶液注入柱中，再注入10mL丙酮：正己烷（3：1）混合溶液，弃去流出液。注入15mL丙酮：甲醇（9：1）混合溶液，收集流出液于磨口减压浓缩器中，40℃以下除去丙酮及甲醇。残留物中加入乙腈：水（9：1）混合溶液溶解，准确至1mL，此为试验溶液。
6．测定方法
a 定性试验
按照下列操作条件进行试验。试验结果必须与同样操作条件下标准品的结果一致。
操作条件
柱填充剂：十八烷基甲硅烷基化硅胶（粒径5μm）。
柱：内径4.6mm，长250mm的不锈钢管。
柱温：40℃。
检测器：波长245nm。
流动相：A为乙腈，B为0.01％三氯乙酸水溶液。调整流速使氯吡嘧磺隆约13分钟流出。
浓度梯度：15分钟内A：B浓度梯度从(1：4) 运行到 (1：0) ，再用A运行5分钟后，在1分钟内回到A：B(1：4)，保持运行7分钟。
b 定量试验
根据与a 定性试验相同的操作条件下所得试验结果，峰高法或峰面积法定量。
c 确证试验
在与a 定性试验相同的操作条件下，用液相色谱--质谱仪测定。试验结果必须与标准品的一致。此外，必要时用峰高法或峰面积法进行定量。
7．定量限
四唑嘧磺隆：0.01 mg/kg             
氯吡嘧磺隆：0.02 mg/kg             
嘧啶磺隆：0.02 mg/kg            
   

 

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