GB4789.4-2024食品中沙门氏菌检验新版标准更改详解

一、版本概况

  GB4789.4食品中沙门氏菌检验标准从1994版到即将实施的2024版，总共经历了6个版本的更新。与2016版本相比，2024版本主要在一些操作细节、使用培养基的调整及鉴定方法做了变更，预计将在2024年8月份正式实施。

二、变更内容

  1.样品预增菌改动

  （1）增加乳粉检验前处理的说明，25g乳粉加入至225mL BPW液体表面，暂不调整pH也不混匀，室温静置60±5min后再混匀，36℃培养16-18h。此操作是经过实验室验证，有助于受损沙门细菌的恢复，减少对沙门氏菌的损伤，提高检出率。

  （2）冷冻产品的解冻温度由45℃以下更改为40-45℃，2-5℃更改为2-8℃，主要是更加贴合冰箱的冷藏温度。

  2.选择性增菌步骤改动

  （1）RVS替代原来的SC培养基，一方面是因为SC培养基里面的亚硒酸氢钠有剧毒，对人体健康和环境危害比较大，且储存不稳定易分解，另一方面受社会现状的影响，目前疾控监测伤寒沙门氏菌导致的发病率并不高，适合伤寒沙门氏菌生长的SC相对来讲适用性不是很强了，更换为RVS培养箱相应也可以提高检出率（RVS具有更强的选择性，抑制杂菌的效果要强于SC）。同时培养温度变为42℃，接种体积变为0.1mL。

  （2）TTB培养温度增加了可选择36±1℃进行培养，主要是考虑到了样品背景菌的影响。对于进行一定加工过的样品，通常背景菌含量较少，干扰性不强，在36±1℃培养即可。而对于背景菌含量相对较高的样品（如生鲜禽肉等），杂菌的干扰性相对较大，提高至42℃培养可以在一定程度上减少杂菌的繁殖，提高检出率。

  （3）增加了预增菌液（BPW）允许在2-8℃冷藏保存不超过72h再进行选择性增菌，通过验证，此操作对最终检出率没有显著影响，也是考虑到企业现状，如果遇到休班或者其他原因不能当天及时检验等情况，可以暂存在2-8℃冰箱内冷藏待检。

  3.分离步骤改动

  增加了选择性增菌液（TTB和RVS）允许在2-8℃冷藏保存不超过72h，再转接选择性平板进行分离培养，原因同上。

  4.生化鉴定步骤改动

  （1）挑取菌落数由原来的选择性平板分别挑取2个菌落更改为总共挑取4个以上的典型菌落，且宜选择来自不同增菌液和不同选择性平板上的菌落，同时也允许先对一个可疑或典型菌落进行鉴定，若不是沙门再对其他可疑菌落进行鉴定。新标准的方法更具有灵活性，可疑根据实际的检验结果来进行选择鉴定，同时也能减少工作量，降低检验成本，节约试剂。

  （2）生化鉴定出现A1反应时，增加血清学鉴定后报告结果，出现A3反应补做ONPG后，也要加血清学鉴定后报告结果。表5的生化群和生化反应进行了扩充，新标准列出7个亚种，相比较于原标准，增加了明胶酶、酒石酸盐、半乳糖醛酸、γ-谷胺酰转肽酶，β-葡糖醛酸苷酶、黏液酸、乳糖、O1噬菌体裂解试验。在进行判定上与原标准基本上没有改动，只是增加了项目。

  5.血清鉴定：主要在H抗原鉴定上，详细写出了简易平板法、小玻管法和小套管法操作方法。

  6.培养基配方改动

  （1）TTB：成分没有改变，但基础液体积由原来的1050mL更改为1000mL，灭菌温度由121℃20min更改为加热煮沸灭菌，pH由7.0±0.2更改为7.6±0.2。名称2024版存在一点问题，前后不一致，前半部分内容使用的名称为“四硫磺酸钠煌绿增菌液”，附录名称为“四硫磺酸盐煌绿增菌液”。

  （2）新增RVS配方，删除SC。

  （3）HE、BS、XLD、TSI等培养基一些成分名称做了规范化更改（如牛肉膏改为了牛肉浸粉，酵母膏改为了酵母浸粉），倾注平板的温度都由50-55℃调整为48±2℃，个别培养基的琼脂量做了固定，总体变化不大，对培养基使用和效果没有影响。

  （4）蛋白胨水配方中补加了色氨酸，蛋白胨用量减少至10g，主要是增加的色氨酸可以生成更多的吲哚，有利于阳性结果的观察。

  （5）氰化钾试验要求在试验管覆盖石蜡，目的是阻止氰化钾挥发失效导致出现假阳性结果。   

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