吡蚜酮检测方法

磷酸盐缓冲液（pH6）：0.2 mol／L 磷酸二氢钾溶液中加入0.2mol／L磷酸氢二钾溶液，调节至pH6。
4．标准品
吡蚜酮：含吡蚜酮99％以上，熔点为217℃。
5．试验溶液的制备
a 提取方法
① 谷类和豆类
将样品粉碎，通过420μm的标准网筛后，称取其10.0g，加入20ml水，放置2小时。
加入100mL甲醇和5ml 0.5mol／L碳酸钾，搅拌3分钟后，用涂布1cm厚硅藻土的滤纸抽滤于磨口减压浓缩器中，取出滤纸上的残留物，加入50ml甲醇，搅拌3分钟后，按上述同样操作，合并滤液于减压浓缩器中，45℃以下浓缩至约5ml。
将其移入100mL分液漏斗中，用5mL水洗涤上述减压浓缩器的茄型瓶，合并洗液于上述分液漏斗中，再用20mL正己烷洗涤上述减压浓缩器的茄型瓶，合并洗液于分液漏斗中，缓缓振荡1分钟后，静置，弃去正己烷层，水层中再加入20mL正己烷，按上述同样操作，弃去正己烷层，在将水层移入磨口减压浓缩器中，用少量水洗涤分液漏斗，合并滤液于减压浓缩器中，45℃以下浓缩至约5mL，加入5mL水。
② 水果和蔬菜
水果和蔬菜：准确称取约1 kg样品，必要时定量加入适量水，搅切混合均匀后，称取相当于20.0g样品的量。
加入100mL甲醇和5mL 0.5mol／L碳酸钾溶液（梅：3mol／L碳酸钾溶液），搅拌3分钟，用涂布1cm厚硅藻土的滤纸抽滤于磨口减压浓缩器中，取冲滤纸上的残留物，加入50ml甲醇，搅拌3分钟后，按上述同样操作，合并滤液于减压浓缩器中，45℃以下浓缩至约5ml，加入5m水。
b、净化方法
① 乙基甲硅烷基化硅胶柱和酰胺丙基甲硅烷基化硅胶柱色谱法
在乙基甲硅烷基化硅胶小柱（1000mg）(C2)中注入10mL甲醇，弃去流出液。再注入10mL水，弃去流出液。柱中注入a 提取方法所得的溶液后，注入10mL水，弃去流出液。抽滤一分钟，除去水分。另外一根酰胺丙基甲硅烷基化硅胶小柱（500mg）(NH2)中注入10mL甲醇，弃去流出液，在酰胺丙基甲硅烷基化硅胶小柱(C2)上面连接上述的乙基甲硅烷基化硅胶小柱(NH2)，注入20mL甲醇，收集流出液于磨口减压浓缩器中，在40℃以下除去甲醇，残留物中加入5mL乙醇：正己烷（1：4）混合溶液溶解。
② 硅胶柱色谱法
在硅胶小柱（1000mg）(Silica)中注入10mL正已烷，弃去流出液。柱中注入①乙基甲硅烷基化硅胶柱(C2)和酰胺丙基甲硅烷基化硅胶柱(Silica)色谱法所得的溶液后，注入10mL乙醇：正已烷（1：4）混合溶液，弃去流出液，再加入20mL乙醇：正已烷（2：3）混合溶液，收集流出液于磨口减压浓缩器中，在40℃以下除去乙醇和正已烷，残留物中加入5mL水：甲醇（9：1）混合溶液溶解。
③ 十八烷基甲硅烷基化硅胶柱色谱法
十八烷基甲硅烷基化硅胶小柱（1000mg）(C18)中注入10mL甲醇，弃去流出液，再注入10mL水，弃去流出液。柱中注入②硅胶柱色谱法所得的溶液后，注入15mL水：甲醇（9：1）混合溶液，弃去流出液，再加入10mL水：甲醇（7：3）混合溶液，收集流出液于磨口减压浓缩器中，在45℃以下除去水和甲醇，残留物中加入2mL水：甲醇（4：1）混合溶液溶解，此为试验溶液。
6、操作方法。
a 定性试验
按下列操作条件进行试验，试验结果应与标准品的一致。
操作条件
柱填充剂：十八烷基甲硅烷基化硅胶（粒径5μm）。
柱：内径4.6mm、长250mm不锈钢管。
柱温：40℃
检测器：波长298nm。
流动相：水：甲醇：磷酸盐缓冲液（pH6）（18：5：2）的混合溶液。调整流速使吡蚜酮在10～12分钟流出。
b 定量试验
根据与a 定性试验相同的试验条件所得的试验结果，峰高法或峰面积法定量。
c 确证试验
按照下列操作条件，用液相色谱—质谱仪测定，试验结果应与标准品的一致。此外，必要时用峰高法或峰面积法进行定量。
操作条件
柱填充剂：十八烷基甲硅烷基化硅胶（粒径5μm）。
柱：内径2.0mm、长150mm不锈钢管。
柱温：40℃
流动相：水：甲醇（4：1）混合溶液。调整流速使吡蚜酮在10～12分钟流出。
7．定量限
谷类、豆类：0.01 mg/kg ，水果、蔬菜：0.005 mg/kg。
8．注意事項
吡蚜酮必须在碱性条件下进行提取。   
   

 

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