洁净区沉降菌监测是通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的洁净度。其主要适用于食品、药品、化妆品、环境监测等领域，有助于保障产品质量和公共卫生安全。有关无菌环境的监控和检测可参考实验室无菌环境怎样监控和检测？在实际操作中，洁净度等级不同的区域，沉降菌监测点的设置和评估标准均有差异，本文主要介绍实际操作时需注意的几个要点。

1、培养用品

  培养皿，一般采用直径Φ90mm×15mm规格的培养皿；培养基，大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）或沙氏培养基（SDA）或用户认可并经验证了的培养基；恒温培养箱，必须定期对恒温培养箱进行校验。

2、测试条件

  在测试之前，要对洁净室（区）相关参数进行预先测试，这类测试将会提供测试沉降菌的环境条件。

  a）温度和相对湿度的测试。洁净室（区）的温度和相对湿度应与其生产及工艺要求相适应（无特殊要求时，温度在18℃~26℃，相对湿度在45%~65%为宜），同时应满足测试仪器的使用范围。

  b）室内送风量或风速的测试，或压差的测试。

  c）高效过滤器的泄漏测试。

3、采样点设置

 （1）采样点的数目

  沉降菌测试的最少采样点数目的确定有两种方式可以选择，一种是取洁净室或洁净区的面积（A）的算术平方根，即NL=A

表1  最少采样点数目

  举例说明：

  一个100 m2的洁净室，按照第一种方法计算，最少采样点应为10个；按照第二种方法查表可得，100级洁净区采样点至少为40个，10000级洁净区采样点至少为10个，10万和30万级洁净区采样点至少为3个；若洁净区有级别规定，尽量采用第二种方法进行采样点数目的设置。

 （2）采样点的位置设置

  a）采样点一般在离地面0.8m高度的水平面上均匀布置。

  b）采样点多于5点时，也可以在离地面0.8m~1.5m高度的区域内分层布置，但每层不少于5点。

  c）洁净室（区）采样点布置宜力求均匀，避免采样点在局部区域过于稀疏，可在关键设备或关键工作活动范围处增加测点。

  多点采样的采样点布置规则如图1。

图1 平面采样点布置图

（3）最少培养皿数

  在满足最少采样点数目的同时，还宜满足最少培养皿数，见表2.

  表2 最少培养皿数

4、测试步骤

（1）测试前培养皿表面必须严格消毒。

（2）将已制备好的培养皿按采样点布置图逐个放置，然后从里到外逐个打开培养皿盖，使培养基表面暴露在空气中。

（3）静态测试时，培养皿暴露时间为30min以上，动态测试时，培养皿暴露时间为不大于4h。

（4）全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。

（5）采用大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）配制的培养皿经采样后，在30℃~35℃培养箱中培养，时间不少于2 d；采用沙氏培养基（SDA）配制的培养皿经采样后，在20℃~25℃培养箱中培养，时间不少于5d。

（6）每批培养基应有对照试验，检验培养基本身是否污染。可每批选定3只培养皿作对照培养。

5、结果计算

（1）用计数方法得出各个培养皿的菌落数。

（2）每个测点的沉降菌平均菌落数的计算，如下公式。

          M1—1号培养皿菌落数；

          M2—2号培养皿菌落数；

          Mn—n号培养皿菌落数；

          n一培养皿总数。

6、结果评定与纠正

  每个测点的沉降菌平均菌落数必须低于所选定评定标准中的界限（如表3）。

表3 洁净室（区）沉降菌技术要求

  在静态测试时，若某测点的沉降菌平均菌落数超过评定标准，则应重新采样两次，两次测试结果均合格才能判为符合。

7、频次设置

  对于沉降菌的取样频次，如果出现下列情况应考虑修改，在评估以下情况后，也应确定其他项目的检测频次：

（1）连续超过纠偏限度和警戒限度；

（2）停工时间比预计延长；

（3）关键区域内发现有污染存在；

（4）在生产期间，空气净化系统进行任何重大的维修；

（5）日常操作记录反映出倾向性的数据；

（6）消毒规程的改变；

（7）引起生物污染的事故等；

（8）当生产设备有重大维修或增加设备时；

（9）当洁净室（区）结构或区域分布有重大变动时。

相关产品：

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参考文献：

GB/T 16292-2010 医药工业洁净室（区）悬浮粒子的测试方法

GB/T 16294-2010 医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法

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