利用阻断突变技术确定中间代谢产物

将抗生素生产菌经诱变处理后筛选出失去生产能力的突变株，如果生产能力的丧失是一次突变的结果，往往意味着抗生素生物合成途径中的某一种酶已经失活，这样的突变株称为阻断突变株。由于酶失活，使生物合成不能继续，中间代谢产物就会积累并被分离提纯。关键问题是要确认它的确是抗生素合成的中间代谢产物，为此也必须借助于放射性标记技术。在培养阻断突变株的培养基中加人放射性标记的前体，就可以得到有放射性标记的中间代谢产物，然后将它加到抗生素生产菌种的培养基中，如果结合到抗生素分子中的带有放射性标记中间产物的比例很高，就可以证明该物质是抗生素代谢途径的中间产物。另外一种方法是在不加营养物质的悬浮细胞培养时，如果加人了中间产物后能够提高抗生素产量，也可以间接证明该物质确实是中间代谢产物。

那么，怎样确定突变株只经过一次突变呢?如果将两个突变株放在一个摇瓶中进行混合培养并与它们的单独培养进行比较，如果其中的一个突变株单独培养时不产中间代谢产物而混合培养时能检测到，则说明该菌株可能经历了两次突变；而一起培养的另一菌株则具有积累中间代谢产物的能力，从而证明它只经历了一次突变。如果混合培养时一个突变株产生的中间代谢产物被另一个突变株消耗，则可以通过将其中一个突变株单独培养的培养液加到另一突变株的培养液，看该突变株是否能恢复抗生素生产，如果是的话，就可证实后者具有积累中间代谢产物的能力。

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