一、产品用途
用于拮抗剂的检测。
二、试验原理
本法是利用抗生素在琼脂培养基内的扩散作用,抑菌圈直径与抗生素浓度或活性相关,比较标准品与供试品两者对接种的实验菌产生抑菌圈的大小,以测试供试品效价的一种方法。
三、培养基配方(g/L)
蛋白胨 |
10.0 |
牛肉粉 |
3.0 |
酵母浸粉 |
3.0 |
葡萄糖 |
1.0 |
氯化钠 |
5.0 |
琼脂 |
14.0 |
此配方可以进行改良或增加营养成分以获得最佳的结果
四、试验方法
1、称取本品36.0g,加热溶解于1000ml蒸馏水中,分装,121℃高压灭菌15min,备用。
2、将质控菌株稀释至合适梯度,制成含菌量10-100CFU/mL的菌悬液。
3、取平板分别注入加热融化的培养基20ml,放置水平台上使之凝固,作为底层。另取适量培养基,在48-50℃加入规定菌量的菌悬液,摇匀。在平板中分别加入5ml,使其在顶部摊布均匀,作为菌层,放置在水平台上冷却凝固。
4、在凝固的平板中放置牛津杯,用压杯板压置10秒。
5、在每一个小管中加入标准品,转移至培养箱30℃培养24-36小时。
五、试验结果
接种以下质控菌株,在36±1℃培养18-22小时:
质控菌株 |
菌株编号 |
接种量(CFU) |
回收率 |
生长情况 |
其他特征 |
藤黄微球菌 |
CMCC(F)28001 |
50-100CFU |
/ |
+++ |
黄色菌落 |
质控结果:
六、注意事项
1、注入培养基总量不大于20ml,否则放置牛津杯后平皿盖无法盖紧。
2、菌量浓度适宜,若菌量浓度过小,则菌层生长弱做不出抑菌圈
3、菌层培养基表面应平整,否则漏液。
4、牛津杯中央有凸点为正面。
5、压杯板已辐照灭菌,酒精棉擦拭可重复使用。
6、将平皿转移至培养箱培养过程中应保持稳定,以免影响实验效果。
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