一、用途
用于滤膜法测定生活饮用水及其水源水中的总大肠菌群。
二、培养基配方(g/L):
蛋白胨 |
10.0 |
磷酸二氢钾 |
2.5 |
乳糖 |
10.0 |
无水亚硫酸钠 |
3.3 |
碱性品红 |
0.3 |
琼脂 |
12.5 |
pH7.4±0.2 25℃ |
此配方可以进行改良或增加营养成分以获得最佳的结果。
三、试验原理:
蛋白胨提供氮源、维生素、氨基酸和碳源;磷酸二氢钾是缓冲剂;乳糖是大肠菌群可发酵的糖类;碱性品红为指示剂,具有醌式结构,呈深红色,亚硫酸钠能将碱性品红还原,使其褪色,所以制成的培养基呈淡粉红色;发酵乳糖的细菌产生乙醛,与亚硫酸钠结合,可恢复碱性品红的醌式结构,所以菌落呈深红色;沙门氏和志贺氏菌属细菌不发酵乳糖,故菌落与培养基同为淡红色或无色;琼脂是培养基的凝固剂。
四、试验方法:
1. 称取本品39.0g,加入20ml无水乙醇和980ml蒸馏水中加热搅拌溶解,分装,121℃高压灭菌15分钟,备用。
2. 制备质控菌液,选择合适稀释度的目标菌质控菌液0.1ml,均匀涂布于待测平板以及参比平板上,每一稀释度接种两个平板。
3. 用1μL接种环取非目标菌质控菌液1环,将接种环接触容器边缘3次去除多余液体,在平板表面划六条平行直线,同时接种两个平板。
4. 36±1℃倒置培养基培养24±2小时,记录实验结果。
五、试验结果:
接种以下质控菌株,36±1℃需氧培养22-26小时:
质控菌株 |
菌株编号 |
接种量(CFU) |
参比或计数 培养基 |
方法 |
质控评定标准 |
其他特征 |
金黄色葡萄球菌 |
ATCC6538 |
/ |
/ |
半定量 |
G≤1 |
/ |
大肠埃希氏菌 |
ATCC25922 |
20-200 |
TSA |
定量 |
PR≥0.5 |
紫红色菌落,有金属光泽 |
产气肠杆菌 |
CMCC(B)45103 |
20-200 |
|
|
PR≥0.5 |
紫红色菌落 |
阴沟肠杆菌 |
ATCC23355 |
20-200 |
|
|
PR≥0.5 |
紫红色菌落,有金属光泽 |
弗氏柠檬酸杆菌 |
ATCC43864 |
20-200 |
|
|
PR≥0.5 |
紫红色菌落,有金属光泽 |
伤寒沙门氏菌 |
ATCC14028 |
20-200 |
|
|
PR≥0.5 |
无色菌落 |
图1 Endo培养基微生物质控结果
备注:a:阴沟肠杆菌,b:弗氏柠檬酸杆菌,c:产气肠杆菌,d:大肠埃希氏菌,e:沙门氏菌,f:金黄色葡萄球菌
六、方法的局限性:
本培养基仅为细菌鉴定的一部分,需做其他补充试验。
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