培养基pH的检测、调整与影响

  培养基的pH是影响培养基性能的重要指标之一，大多数培养基都是有固定的pH范围，pH的偏离对培养基的指示能力、微生物的生长状况都有可能产生影响，因此在配制培养基时，pH的检测、调整和控制也是非常关键的。

一、培养基pH的检测

  早期的培养基标准由于不完善和存在争议等问题，甚至在不同的文献或标准中有着不同的范围，随着现在标准制定越来越严格和完善，目前主流标准中都规定了培养基的pH应该以灭菌后25℃测定结果为准。

  1.液体培养基

液体培养基pH的测定比较简单，将培养基灭菌后冷却至25℃时使用pH计测定即可。

  2.固体/半固体培养基

一些培养基因含有琼脂，灭菌后冷却至25℃时呈凝固状态。对于此类培养基的pH测定方法，目前标准中未规定的特别详细。现在市场上已经有专门用来测定固体培养基pH专用的pH计探头，若没有的话，也可使用复合电极检测（经过实测，使用复合电极插入培养基中测定也能比较准确的反应培养基的pH）。

  注：（1）有些培养基灭菌后需额外补充其他成分，一般来说应以完整培养基的pH测定结果为准。（2）不同的培养基pH受温度影响会有变化，所以一定要在培养基25℃时进行测定（不建议使用温度补偿功能，会有偏差）。（3）不需要知道培养基的准确pH时，使用pH试纸可以观察培养基大致的pH值。但要注意，有些培养基因本身带有颜色或者含有酸碱指示剂，不适合用pH试纸检测，不同的颜色相互混合会出现其他颜色反应。

二、培养基pH的调整

  现在市场上卖的商品化培养基大多数已经调整好了培养基，无需另外调整。但有时候受灭菌工艺（如不同的灭菌锅整个加热时长会有差别，导致灭菌后pH可能偏离，或者更换灭菌方式也会导致pH不在范围内）或特殊用途等因素需要进行培养基pH的调整，一般可使用1mol/L的盐酸或氢氧化钠调整（也可使用苹果酸、酒石酸、碳酸钠等进行调整），一般要在灭菌前完成调整。若要在灭菌后进行调整则比较困难，需要使用无菌的酸溶液或碱溶液进行调整。

三、培养基pH对使用效果的影响

  大多数培养基都是有0.2-0.4的波动范围（如TSB要求pH值为7.3±0.2），对于没有规定范围的培养基，一般控制在±0.2范围内即可。不同的培养基若pH出现偏离，也会有不同的影响。

  对于大多数的培养基来说，pH的少量偏离通常不会造成显著的不良影响。如TSB要求pH在7.3±0.2，实际上pH即使下降0.1-0.2对使用结果也无显著影响，这是因为多数微生物的生长范围是比较宽泛的，并不是一定要在7.1-7.5之间才能生长。但要注意，有些培养基的pH不能偏离过大，特别是以酸碱度进行筛选的培养基或者含有酸碱指示剂的培养基，如TCBS琼脂要求pH为8.4-8.8，属于偏碱性的环境，弧菌可以在此培养基上生长，而不耐碱性环境的杂菌则不生长或生长差，若pH偏低则可能导致一些杂菌过多生长，若pH偏高则可能导致弧菌生长不良。此外培养基中含有酸碱指示剂，若培养基的pH不正确，配制出的培养基颜色也会不正确，最终细菌生长后培养基的颜色变化也可能会出现偏差，导致无法准确判断结果。

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